i. Pembuatan larutan aluminium klorida 10
Sebanyak 5,0 g aluminium klorida dilarutkan dengan aquades secukupnya dalam beaker glass, larutan kemudian dipindahkan dalam labu takar 50,0mL
dan ditambahkan aquades hingga batas tanda. j.
Pembuatan larutan natrium hidroksida 10 Sebanyak 10,0 g natrium hidroksida dilarutkan dengan aquades secukupnya
dalam beaker glass, larutan kemudian dipindahkan dalam labu takar 100,0mL dan ditambahkan aquades hingga batas tanda.
8. Optimasi Metode
a. Penentuan waktu operasi
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600 μL larutan
Deoksiribosa 2,5mM, 300 μL FeCl
3
1mM, 300 μL EDTA 1mM, 300 μL
H
2
O
2
20mM, 4500 μL buffer fosfat pH 7,4, dan 300 μL vitamin C 1mM.
Vorteks campuran, kemudian inkubasi pada suhu 37
o
C selama 30 menit. Setelah itu tambahkan 1 mL TBA 1 dan 1 mL TCA 5 , vorteks
campuran, kemudian panaskan dengan waterbath pada suhu 80
o
C selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah air
mengalir selama 5 menit. Larutan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang maksimum teoritis 532 nm selama 30 menit.
b. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600 μL larutan
Deoksiribosa 2,5mM, 300 μL FeCl
3
1mM, 300 μL EDTA 1mM, 300 μL
H
2
O
2
20mM, 4500 μL buffer fosfat pH 7,4, dan 300 μL vitamin C 1mM.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Vorteks campuran, kemudian inkubasi pada suhu 37
o
C selama 30 menit. Setelah itu tambahkan 1 mL TBA 1 dan 1 mL TCA 5 , vorteks
campuran, kemudian panaskan dengan waterbath pada suhu 80
o
C selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah air
mengalir selama 5 menit. Larutan dibaca absorbansinya dari panjang gelombang 400-600 nm.
9. Uji aktivitas penangkapan radikal hidroksil oleh fraksi etil asetat buah ketapang
a. Pembuatan larutan kontrol
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan 300 μL FeCl
3
1mM, 300 μL EDTA
1mM, 300 μL H
2
O
2
20mM, 4500 μL buffer fosfat pH 7,4, dan 300 μL
vitamin C 1mM. Vorteks campuran, kemudian inkubasi pada suhu 37
o
C selama 30 menit. Setelah itu tambahkan 1 mL TBA 1 dan 1 mL TCA 5,
vorteks campuran, kemudian panaskan dengan waterbath pada suhu 80
o
C selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah
air mengalir selama 5 menit. b.
Penentuan aktivitas penangkapan radikal hidroksil Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600
μL larutan Deoksiribosa 2,5mM dan fraksi etil asetat buah ketapang sebanyak 200, 400,
600, 800, dan 1000 μL, kemudian pada masing-masing tabung ditambahkan
300 μL FeCl
3
1mM, 300 μL EDTA 1mM, 300 μL H
2
O
2
20mM, buffer fosfat pH 7,4 penambahan buffer fosfat disesuaikan dengan volume fraksi
etil asetat yang ditambahkan sehingga volume akhir larutan 6 mL, dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
300 μL vitamin C 1mM. Vorteks campuran, kemudian inkubasi pada suhu
37
o
C selama 30 menit. Setelah itu tambahkan 1 mL TBA 1 dan 1 mL TCA 5, vorteks campuran, kemudian panaskan dengan waterbath pada
suhu 80
o
C selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah air mengalir selama 5 menit. Larutan dibaca
absorbansinya pada panjang gelombang maksimum hasil optimasi.
10. Penentuan kadar flavonoid total
