Tabel 2.1. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Bawang Lanang Golongan Senyawa
Kimia Ekstrak bawang
lanang menggunakan pelarut etanol
Alkaloid -
Flavonoid +
Saponin +
Kuinon -
Steroid dan Triterpenoid -
Tanin dan Polifenol -
Keterangan: + positif mengandung - negatif tidak mengandung
B. Bakteri
Bakteri merupakan organisme yang sangat kecil berukuran mikroskopis. Bakteri rata-rata berukuran lebar 0,5-1 mikron dan panjang
hingga 10 mikron 1 mikron = 10
-3
mm. Bakteri termasuk mikroorganisme yang sangat kecil. Sehingga, untuk melihat bakteri perlu diwarnai, pewarnaan
ini disebut pengecatan bakteri Irianto, 2006. Pengecatan bakteri sudah dilakukan sejak permulaan berkembangnya
mikrobiologi di pertengahan abad ke
– 19 oleh Louis Pasteur dan Robert Koch. Pada umumnya, ada dua macam zat warna bahan cat yang sering
dipakai, yaitu sebagai berikut. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1. Zat warna yang bersifat asam; komponen warnanya adalah anion,
biasanya dalam bentuk garam natrium. 2.
Zat warna yang bersifat alkalis; dengan komponen warna kation, biasanya dalam bentuk klorida.
Setelah dilakukan pengecatan, dalam tubuh bakteri akan terjadi proses pertukaran ion-ion zat warna dengan ion-ion protoplasma misalnya
asam nukleat bakteri. Pada umumnya, larutan-larutan zat warna yang digunakan adalah larutan encer, jarang lebih dari 1 persen. Larutan encer yang
dibiarkan berkontak agak lama dengan bakteri bekerja lebih baik dari larutan pekat dengan waktu yang singkat Irianto, 2006. Untuk mendapatkan hasil
pengecatan yang lebih baik, tidak jarang dibutuhkan bahan penolong, yang biasanya disebut pemantek mordant. Pemantek ini dapat diartikan sebagai
suatu zat yang sanggup bergabung dengan komponen zat warna tertentu, sehingga terbentuk senyawa yang tidak dapat larut dan melekat pada tubuh
bakteri. Pemantek dapat diberikan dalam berbagai keadaan yaitu sebelum penambahan bahan cat, dimasukkan ke dalam larutan bahan cat, dan diberikan
antara pemakaian dua larutan bahan cat Irianto, 2006. Terdapat beberapa cara dalam pengecatan bakteri, antara lain:
1. Pengecatan Negatif
Tujuan pengecatan negatif adalah untuk mengamati morfologi organisme. Metode ini bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai
latar belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme kelihatan transparan tembus pandang. Teknik ini
berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan
bahan-bahan kimia, maka terjadinya penyusutan dan salah satu bentuk agar kurang sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat.
Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina. Pewarnaan negatif memerlukan pewarna asam seperti eosin atau negrosin. Pewarna asam
memiliki muatan negatif kromogen, tidak akan menembus atau berpenetrasi ke dalam sel karena muatan negatif pada permukaan bakteri.
Oleh karena itu, sel tidak berwarna mudah dilihat dengan latar belakang berwarna Lestari, 2012.
2. Pengecatan Gram
Pengecatan gram ialah pengecatan yang dilakukan pada bakteri dengan tujuan untuk mengetahui apakah suatu bakteri termasuk ke dalam
bakteri gram positif atau bakteri gram negatif. Pengecatan ini pertama kali
dikemukakan oleh Christian Gram 1884. Pengecatan ini film bakteri
mula-mula dilapisi dengan larutan zat warna karbol gentinviolet karbol kristal violet, karbol metil violet dan didiamkan beberapa lama, kemudian
disiram dengan larutan iodium dan dibiarkan terendam dalam waktu yang sama. Sampai tingkat pengecatan ini selesai, semua bakteri akan terwarna
ungu. Selanjutnya, preparat didekolorisasi dengan alkohol atau campuran alkohol dan aseton sampai semua zat warna tampak luntur dari film.
Setelah dicuci dengan air, preparat diberi warna kontras counterstain seperti safranin.
Di antara bermacam-macam bakteri yang dicat, ada yang dapat menahan zat warna ungu metil violet, kristal violet, gentian violet dalam
tubuhnya meskipun telah didekolorisasi dengan alkohol atau aseton. Dengan demikian tubuh bakteri itu tetap berwarna ungu meskipun disertai
dengan pengecatan oleh zat warna kontras, warna ungu itu tetap dipertahankan. Bakteri yang memberi reaksi semacam ini dinamakan
bakteri gram positif. Sebaliknya bakteri yang tidak dapat menahan zat warna setelah dekolorisasi dengan alkohol akan kembali menjadi tidak
berwarna dan bila diberikan pengecatan dengan zat warna kontras, akan berwarna sesuai dengan zat warna kontras. Bakteri yang memperlihatkan
reaksi semacam ini dinamakan bakteri gram negatif Irianto, 2006. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Tabel 2.2. Proses Pengecatan Gram Irianto, 2006
Larutan Waktu
Hasil pada bakteri Gram +
Gram -
Kristal Violet 60 detik
Sel berwarna ungu Sel berwarna
ungu
Larutan Iodium 60 detik
Sel tetap berwarna ungu
Sel tetap berwarna ungu
Alkohol 30 detik
Dinding sel mengalami dehidrasi
sehingga pori-pori mengecil dan zat
warna ungu tidak dapat keluar,
sehingga sel tetap berwarna ungu
Lipid terekstraksi dari dinding sel,
pori-pori membesar
sehingga zat warna ungu
keluar, sel menjadi tidak
berwarna
Safranin 60 detik
Sel tidak terpengaruh
sehingga tetap berwarna ungu
Sel menyerap warna safranin
sehingga sel tetap berwarna merah
Keterangan: + = Positif; - = Negatif
Atas dasar pengecatan Gram ini dunia bakteri dibagi dalam dua golongan besar, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif Irianto,
2006. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Sumber: Radji, 2011
Gambar 2.2.Diferensiasi Zat Warna pada Proses Pewarnaan Gram
C. Faktor Pertumbuhan Bakteri
