3.5.1 Persiapan Subkultur Kapang Endofit
Subkultur kapang endofit sebanyak 27 dengan genus berbeda ditumbuhkan pada cawan petri berisi media Potato Dextrose Agar PDA. Proses peremajaan
subkultur ke media PDA baru bertujuan agar kapang tidak mati. Subkultur kapang dari media PDA lama dicetak menggunakan sedotan steril. Kapang lalu
dipindahkan ke media PDA baru menggunakan tusuk gigi steril. Subkultur kapang ditumbuhkan di media PDA cawan dan PDA tabung.
3.5.2 Pembuatan Media 3.5.2.1 Pembuatan Media PDA dan PDB
Sebanyak 39,0 g PDA dilarutkan di dalam 1000 ml akuades menggunakan erlenmeyer. Larutan dihomogenisasi dan dididihkan menggunakan hot plate dan
magnetic stirer. Media PDA lalu disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm.
Sebanyak 26,4 g PDB dilarutkan di dalam 1000 ml akuades menggunakan erlenmeyer. Larutan dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer.
Media dituang ke dalam botol besar sebanyak 200 ml. Media PDB disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm.
3.5.2.2 Pembuatan Media Nutrient Agar NA dan Nutrient Broth NB
Media NA sebanyak 28 g dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Larutan dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer. Media disterilisasi
dengan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm. Media NB sebanyak 9 g dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Larutan
dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer. Media NB lalu
disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm.
3.5.2.3 Pembuatan Media Preservasi Kapang Endofit
Gliserol sebanyak 10 ml dan trehalosa 1 g ditera hingga 100 ml dengan aquades lalu dihomogenkan menggunakan hot plate dan magnetic stirer.
Campuran tersebut dimasukkan ke dalam cryotube sebanyak 0,8 ml, lalu disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada
tekanan 1,5 atm LIPI, 2006.
3.5.3 Subkultur Kapang Endofit
Masing-masing subkultur kapang endofit ditanam pada media PDA di cawan petri selama 7 hari Arisanti et al., 2011. Miselium kapang yang telah
tumbuh diambil dan ditanam kembali pada media PDA miring. Pengamatan morfologi kapang secara makroskopis dan mikroskopis untuk verifikasi.
3.5.3.1 Pengamatan Makroskopis
Pengamatan makroskopis dilakukan dengan cara menumbuhkan subkultur kapang dalam cawan petri sekitar ±7 hari. Miselium yang terbentuk diamati
karakteristik morfologi koloninya. Warna miselium dicatat, bentuk area miselium, bentuk tepi miselium. Hasil pengamatan didokumentasikan menggunakan kamera.
3.5.3.2 Pengamatan Mikroskopis
Subkultur kapang diamati menggunakan mikroskop stereo. Konidia atau miselium diamati dan diambil dengan ose secara aseptis. Preparat di atas gelas
objek yang telah ditetesi shear’s lalu diamati menggunakan mikroskop cahaya
Kategori