3.4 Sumber Subkultur
Kapang endofit yang digunakan sebanyak 27 subkultur yaitu genus Fusarium, Neofusicoccum, Cercospora, Cladosporium, Trichoderma, Guignardia,
Gliocladiopsis, Diaporthe, Phoma, Penicillium, Pestalotiopsis, Lestosphaerulina dan Aspergillus. Subkultur kapang sudah diidentifikasi secara molekuler. Kapang
diisolasi dari tanaman kina di Pusat Perkebunan Teh dan Kina PPTK, Gambung, Ciwidey, Bandung, Jawa Barat. Isolasi kapang dilakukan tanggal 29 September
2012 oleh Nani Radiastuti, M.Si dosen Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Isolasi pukul 09.00-12.00 WIB. Lokasi Sampling l7°
835.78S 107°3059.55E. pH tanah 6,8 dan kelembaban tanah 35.
3.5 Cara Kerja
Gambar 5. Bagan kerja Penelitian
Analisis Metabolit Sekunder Lain GCMS
Analisis Metabolit Sekunder HPLC Ekstraksi Metabolit
Sekunder Kloroform Ekstraksi Metabolit
Sekunder Etil Asetat
Pengujian Alkaloid Kuinin Pengujian Antibakteri
Hasil +- Zona Hambat
Analisis Metabolit Sekunder Lain GCMS
Analisis Data - Kromatogram Preparasi Inokulum Bakteri Uji
Fermentasi Cair Duplo Pengamatan Subkultur Kapang
Sterilisasi Alat, Bahan dan Pembuatan Media
3.5.1 Persiapan Subkultur Kapang Endofit
Subkultur kapang endofit sebanyak 27 dengan genus berbeda ditumbuhkan pada cawan petri berisi media Potato Dextrose Agar PDA. Proses peremajaan
subkultur ke media PDA baru bertujuan agar kapang tidak mati. Subkultur kapang dari media PDA lama dicetak menggunakan sedotan steril. Kapang lalu
dipindahkan ke media PDA baru menggunakan tusuk gigi steril. Subkultur kapang ditumbuhkan di media PDA cawan dan PDA tabung.
3.5.2 Pembuatan Media 3.5.2.1 Pembuatan Media PDA dan PDB
Sebanyak 39,0 g PDA dilarutkan di dalam 1000 ml akuades menggunakan erlenmeyer. Larutan dihomogenisasi dan dididihkan menggunakan hot plate dan
magnetic stirer. Media PDA lalu disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm.
Sebanyak 26,4 g PDB dilarutkan di dalam 1000 ml akuades menggunakan erlenmeyer. Larutan dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer.
Media dituang ke dalam botol besar sebanyak 200 ml. Media PDB disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm.
3.5.2.2 Pembuatan Media Nutrient Agar NA dan Nutrient Broth NB
Media NA sebanyak 28 g dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Larutan dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer. Media disterilisasi
dengan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada tekanan 1,5 atm. Media NB sebanyak 9 g dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Larutan
dihomogenisasi menggunakan hot plate dan magnetic stirer. Media NB lalu
Kategori