16
BAB III METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Desember 2013 sampai bulan Agustus 2014. Lokasi penelitian di Laboratorium Fisiologi dan Laboratorium
Pangan, Pusat Laboratorium Terpadu PLT UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah Laminar Air Flow Cabinet ESCI, cryotube,
kertas saring, rotary evaporator Heidolph, HPLC Perkin Elmer Series 200, Detector UV-Vis Series 200, GCMS Shimadzu QP 2010, magnetic stirer, hot
plate Merck MR300 1K, vortex, mikroskop cahaya dan mikroskop stereo Olympus, autoklaf ALP, oven Memmert, timbangan analitik, dan kamera.
Bahan yang digunakan adalah kapang endofit sebanyak 27 subkultur dengan genus berbeda, kultur bakteri S. aureus ATCC 6538 dan bakteri E. coli
ATCC 8739, plastik tahan panas, kertas cakram steril, antibiotik kloramfenikol, aquades, NaCl, HCl, media Nutrient Agar NA, media Potato Dextrose Agar
Merck, media Potato Dextrose Broth, etil asetat PA EtOAc, kloroform PA CHCl
3
, shear’s, standar kuinin sulfat, alkohol 70.
3.3 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode penelitian survei dengan desain Rancangan Acak Lengkap RAL yang terdiri atas tiga kali pengulangan.
3.4 Sumber Subkultur
Kapang endofit yang digunakan sebanyak 27 subkultur yaitu genus Fusarium, Neofusicoccum, Cercospora, Cladosporium, Trichoderma, Guignardia,
Gliocladiopsis, Diaporthe, Phoma, Penicillium, Pestalotiopsis, Lestosphaerulina dan Aspergillus. Subkultur kapang sudah diidentifikasi secara molekuler. Kapang
diisolasi dari tanaman kina di Pusat Perkebunan Teh dan Kina PPTK, Gambung, Ciwidey, Bandung, Jawa Barat. Isolasi kapang dilakukan tanggal 29 September
2012 oleh Nani Radiastuti, M.Si dosen Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Isolasi pukul 09.00-12.00 WIB. Lokasi Sampling l7°
835.78S 107°3059.55E. pH tanah 6,8 dan kelembaban tanah 35.
3.5 Cara Kerja
Gambar 5. Bagan kerja Penelitian
Analisis Metabolit Sekunder Lain GCMS
Analisis Metabolit Sekunder HPLC Ekstraksi Metabolit
Sekunder Kloroform Ekstraksi Metabolit
Sekunder Etil Asetat
Pengujian Alkaloid Kuinin Pengujian Antibakteri
Hasil +- Zona Hambat
Analisis Metabolit Sekunder Lain GCMS
Analisis Data - Kromatogram Preparasi Inokulum Bakteri Uji
Fermentasi Cair Duplo Pengamatan Subkultur Kapang
Sterilisasi Alat, Bahan dan Pembuatan Media
Kategori