64
B. SARAN
Penelitian yang telah dilakukan hingga saat ini masih banyak kekurangan dan perlu diteliti lebih lanjut antara lain :
• Untuk mengetahui komponen penyusun dari masing-masing ekstrak yang menunjukkan aktivitas antimikroba yang baik, perlu dilakukan identifikasi
fitokimia dengan metode High Performance Layer Chromatoraphy HPLC.
• Optimalisasi proses ekstraksi untuk memperoleh rendemen minyak atsiri dan ekstrak jintan hitam yang tinggi, yaitu dengan mencoba metode
ekstraksi yang lain atau melakukan beberapa perubahan pada parameter ekstraksi, seperti suhu dan jenis pelarut.
• Penentuan nilai MIC dengan metode pengenceran untuk memperoleh nilai MIC yang lebih tepat.
• Aplikasi ekstrak biji jintan hitam pada model sistem pangan.
65
DAFTAR PUSTAKA
Achyad, D. E. dan R. Rasyidah. 2000. Jintan Hitam Nigella sativa L.. www.asiamaya.com. [20 Januari 2006].
Adawiyah, D. R. 1998. Kajian pengembangan metode ekstraksi komponen antimikroba biji buah atung Parinarium glaberium Hassk.. Tesis.
Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Ahmad, I. dan A. Z. Beg. 2001. Antimicrobial and phytochemical studies on 45
Indian medicinal plants against multi-drug resistant human pathogens. Journal of Ethnopharmacology. 74:113-123.
Ahmad, I., Z. Mehmood, dan F. Mohammad. 1998. Screening of some Indian medicinal plants for their antimicrobial properties. Journal of
Ethnopharmacology. 62:183-193. Al-hebshi, N., M. Al-haroni, dan N. Skaug. 2005. In vitro antimicrobial and
resistance-modifying activities of aqueous crude khat extracts against oral microorganisms. Archives of Oral Biology.
www.bora.uib.nobitstream. [12
Agustus 2006]. Aligiannis, N., E. Kalpoutzakis, S. Mitaku, dan I. B. Chinou. 2001. Composition
and antimicrobial activity of the essential oils of two Origanum spesies. Journal of Agricultural Food Chemistry. 49:4168-4170.
Al-Jabre, S., O. M. Al-Akloby, A. R. Al-Qurashi, N. Akhtar, A. Al-Dossary, dan M. A. Randhawa. 2003. Thymoquinone, an active principle of Nigella
sativa , inhibited Aspergillus niger. Pakistan Journal Medical Research, 42
3. www.pmrc.org.pk. [15 Agustus
2006]. Al-Saleh, I. A., G. Billedo, dan I. I. El-Doush. 2006. Levels of selenium, DL-
α- tocopherol, DL- -tocopherol, all-trans-retinol, thymoquinone and thymol
in different brands of Nigella sativa seeds. Journal of Food Composition and Analysis. 19:167-175.
Anonim. 2006
a
. Nigella sativa. www.en.wikipedia
.com. [13 Maret 2006]. Anonim. 2006
b
. Chemical analysis of Black seed Oil. www.blackseed.com. [20 Maret 2006].
Anonim. 2006
c
. Essential Oil. www.wikipedia.com
. [9 November 2006]. Apriantono, A., D. Fardiaz, N. L. Puspitasari, S. Yasni dan S. Budiyanto. 1989.
Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Bogor, IPB Press.
66 Ardiansyah. 2001. Teknik ekstraksi komponen antimikroba andaliman
Zanthoxylum acanthopodicum dan antarasa Litsea cubeba. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Babayan, V. K., D. Koottungal dan G. A. Halaby. 1978. Proximate analysis, fatty acid and amino acid composition of Nigella sativa L. seeds. Journal of
Food Science. 43:1314-1315. Badan Pengawas Obat dan Makanan RI Badan POM RI. 2005. Foodwatch
Sistem Keamanan Pangan Terpadu. Sekretariat Jenderal Jejaring Intelijen Pangan, Jakarta.
Baird-Parker, T. C. 2000. Staphylococcus aureus. Di dalam : Lund, B. M., Baird- Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological Safety and
Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Belitz, H. D. dan W. Grosch. 1999. Food Chemistry. Springer-Verlag, Berlin.
Bloomfield, S. F. 1991. Methods for assesing antimicrobial activity. Di dalam
Denyer S. P. dan W. B. Hugo. eds.. Mechanism of Action of Chemical Biocides their Study and Exploitation. Blackwell Scientific Publication,
London. Branen A. L. dan P. J. Davidson. 1993. Antimicrobials in Foods. Marcel Dekker,
New York. Cahattopadhyay, D., K. Maiti, A. P. Kundu, M. S. Chakraborty, R. Bhadra, S. C.
Mandal, dan A. B. Mandal. 2001. Antimicrobial activity of Alstonia macrophylla
: a folklore of bay islands. Journal of Ethnopharmacology. 77:49-55.
Coconut Coast Handmade Soap Co. 2006. Steam Distillation. www.ccnphawaii.com.htm. [20 September 2006].
D’Aoust J. Y. 2000. Samonella. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological Safety and Quality of Food.
Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Donmez, A. A. dan B. Mutlu. 2004. A new species of Nigella Ranunculaceae
from Turkey. Botanical Journal of the Linnean Society. 146 : 251-255. Dorman H. J. D. dan S. G. Deans. 2000. Antimicrobial agents from plants :
antibacterial activity of plant volatile oils. Journal of Applied Microbiology. 88 : 308-316.
Faizi S, R. A. Khan, S. Azher, S. A. Khan, S. Tauseef, dan A. Ahmad. 2003. New antimicrobial alkaloids from the roots of Polyalthia longifolia var.
pendula. Planta Medical. 69:350—5.
67 Fardiaz, S., Suliantari, dan R. Dewanti. 1987. Bahan Pengajaran Senyawa
Antimikroba. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor. Fardiaz, S. 1989. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan. Pusat Antar
Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor. -------------. 1992. Mikrobiologi Pangan. Gramedia, Jakarta.
Garigga, M., M. Hugas, T. Aymerich dan J. M. Monfort. 1993. Bacteriocinogenic
Activity of Lactobacilli from Fermentation Sausages. Journal of Applied Microbiology. 7:142-148.
Granum, P. E. dan T. C. Baird-Parker. 2000. Bacillus species. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological
Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Harbone, J.B. 1996. Metode Fitokimia. Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Terjemahan. K. Padmawinata dan I. Soediro. Penerbit ITB, Bandung.
Hart, H. 1983. Kimia Organik : Suatu kuliah singkat. Terjemahan. S. Achmadi. Penerbit Erlangga, Jakarta.
Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid II. Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta.
Hinton, A. dan K. D. Ingram. 2000. Use of oleic acid to reduce the population of the bacterial flora of poultry skin. Journal Food Protection. 9:1282-1286.
Hirasa, K. dan M. Takemasa. 1998. Spice Science and Technology. Marcell Dekker, Inc., New York.
Houghton P. J. dan A. Raman. 1998. Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural Extracts. Chapman and Hall, London.
Hu J. P. , N. Takahashi, dan T. Yamada. 2000. Coptidis rhizoma inhibits growth and proteases of oral bacteria. Oral Dis. 6:297—302.
Hutapea, J. R. 1994. Inventaris Tanaman Obat Indonesia III. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Depkes RI.
Javidnia, K., R. Miri, R. B. Najafi, dan N. K. Jahromi. 2003. A preliminary study on the biological activity of Daphne mucronata Royle. DARU, 11 1.
www.diglib.tums.ac.ir . [28 Juli 2006].
Ji, Y. L. , S. K. Yong dan H. S. Dong. 2002. Antimicrobial synergistic effect of linolenic acid and monoglyceride against Bacillus cereus and
Staphylococcus aureus . Journal Agricultural and Food Chemistry. 50 7.
68 Ketaren, S. 1987. Minyak Atsiri Jilid 1. UI Press, Jakarta.
Koster, S. K. 2001. Distillation. www.ulwax.edu.htm
. [20 September 2006]. Lambert, R. J. W., P. N. Skandamis, P. J. Coote, dan G. J. E. Nychas. 2001. A
study of the minimum inhibitory concentration of action oregano essential oil, thymol and carvacrol. Journal of Applied Microbiology. 91:453-462.
Leelapornpisid, P., S. Chansakao, T. Ittiwittayawat, S. Pruksakorn. 2006. Antimicrobial activity of herbal extracts on Staphylococus aureus and
Propionibacterium acnes . www. actahort.com.
Lund, B. M., T. C. Baird-Parker, dan G. W. Gould. 2000. The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Mattjik, A. A. dan M. Sumertajaya. 2000. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab. IPB Press, Bogor.
Mashhadian, N. V. dan H. Rakhshandeh. 2005. Antibacterial and antifungal effects of Nigella sativa extracts against S. aureus, P.aeroginosa, and C.
albicans . Pakistan Journal Medical Science. 21 1:47-52.
www.pjms.com .
[28 Juli 2006]. Meral, G. dan N. U. Karabay. 2002. In vitro antibacterial activities of three
hypericum species from west anatolia. Turkish Electronic Journal of Biotechnology.
http:www.biyotekder.hacettepe.edu.trdergi.html. [28 Juli
2006]. Moyler, D. A. 1994. Spices Recent Advances. Di dalam Charalambous Ed..
Spices, Herbs and Edible Fungi. Elsevier, Amsterdam. Naidu, A. S. 2000. Natural Food Antimicrobial Systems. CRC Press, New York.
Nair, R. dan S. Chanda. 2006. Activity of some medicinal plants against certain
pathogenic bacterial strains. Indian Journal of Pharmacology
. www.findarticles
.com. [28 Juli 2006]. Nikaido, H. dan M. Vaara. 1985. Molecular basis of bacterial outer membran
permeability. Microbiology Review. 49:1-32. Prescott, L. M., J. P. Harley, dan D. A. Klein. 2003. Microbiology. Mc Graw-Hill,
Singapore. Pelczar, M. J. and R. D. Reid. 1979. Microbiology. Mc. Graw Hill Book Co., New
York. Roller, S. 2003. Natural Antimicrobials for Minimal Processing of Foods. CRC
Press, New York.
69 Rota, C., J.J. Carraminana, J. Burillo, A. Herrera. 2004. In vitro antimicrobial
activity of essential oils from aromatic plants against selected foodborne pathogens. Journal of Food protection. 67:1252-1256.
Scalbert, A. 1991. Antimicrobial properties of tannins. Phytochemistry Review. 30 12: 3875-3883.
Singh, G., P. Marimuthu, H. S. Murali, dan A. S. Bawa. 2005. Antioxidative and antibacterial potentials of essential oils and extracts isolated from various
spice materials. Journal of Food Safety. 25:130-145. Still, D. W. 2002. Bioengineering and Breeding Approaches. Dalam :
Phytochemicals in Nutrition and Health. Meskin, M. S, W. R Bidlack, A. J. Davies, S. T. Omeya Eds.. CRC Press, USA, pp. 122-127.
Syamani, F. A. 2001. Kajian ekstraksi oleoresin jinten hitam Nigella sativa L.. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Thongson, C., P. M. Davidson, W. Mahakarnchanakul dan J. Weiss. 2004. Antimicrobial activity of ultrasound-assisted solvent-extracted spices.
Letters in Applied Microbiology. 39:401-406. Tiwari, R. P., S. K. Bharti, H. D. Kaur, R. P. Dikshit G. S. Hoondal. 2005.
Synergistic antimicrobial activity of tea antibiotics. Indian Journal Medical Research. 122:80-84.
WHO. 2005. Food safety and foodborne illness. www.who.int.com
. [27 Maret 2006].
Willshaw, G. A., T. Cheasty, dan H. R. Smith. 2000. Escherichia coli. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The
Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
WordNet. 2006. Extraction. www.answers.comextraction.
[20 November 2006].
.
Lampiran 1.
Skema tahapan penelitian
Digiling
Didistilasi uap
Ulangan
Direfluks dengan pelarut air
Ulangan
Direfluks dengan pelarut etanol
100 ºC, 2 jam
100 ºC, 3 jam
80 ºC, 2 jam
80 ºC, 3 jam Disaring
Disaring Direfluks dengan pelarut organik
heksana, etil asetat, metanol 60 ºC, 3 jam dan 2 jam
dikeringkan dikeringkan
oven vakum oven vakum Dihembus gas N
2
Ditimbang Jintan hitam
Bubuk jintan hitam
Minyak atsiri Komponen volatil
Ampas Komponen non-volatil
Ekstrak Ampas
Ampas Ekstrak
• Dianalisa aktivitas antimikroba
• Dianalisa kualitatif komponen
alkaloid, flavonoid,
terpenoidsteroid, saponin, tanin
Ekstrak heksan, ekstrak metanol, ekstrak etil asetat
Ekstrak pekat Ekstrak pekat
• Dianalisa aktivitas antimikroba • Dianalisa kualitatif komponen alkaloid,
flavonoid, terpenoidsteroid, saponin, tanin • Dianalisa aktivitas antimikroba
• Dianalisa kualitatif komponen alkaloid, flavonoid, terpenoidsteroid, saponin, tanin
71
Lampiran 2. Diagram alir persiapan kultur bakteri dan uji konfirmasi jumlah mikroba
Diambil satu ose Dimasukkan ke dalam 10 ml NB steril
Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC Diambil 1 ml
Dimasukkan ke dalam 9 ml NB steril Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC
Diamati kekeruhannya Keruh Agak bening
Dipipetl 1 ml Dipipet 1 ml Dimasukkan ke dalam
Dimasukkan ke dalam 9 ml pengencer steril 9 ml pengencer steril
Dilakukan pengenceran dari 10
1
-10
8
Dilakukan pengenceran dari 10 -10
5
Dipipet masing-masing 1ml Dipipet masing-masing 1 ml dari pengenceran 10
5
-10
8
dari pengenceran 10 -10
5
Masing-masing dimasukkan Masing-masing dimasukkan
ke dalam cawan petri steril ke dalam cawan petri steril Dituang agar
Didiamkan hingga agar membeku Diinkubasi 48 jam, 37 ºC
Diamati dan dihitung jumlah koloni Ditentukan jumlah µl NB yang akan dimasukkan
ke dalam 25 ml NA cair
A
Kultur bakteri
72
Lampiran 3. Diagram alir uji difusi sumur
Dipipet sejumlah A sesuai hasil pada persiapan kultur
Dimasukkan ke dalam botol berisi 25 ml NA cair steril Dituang ke dalam cawan petri steril
Dibiarkan beku Dibuat 4 lubangsumur
Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl DMSO lar antibiotik sampel sampel
Diinkubasi 37 ºC, 24 jam Diamati dan diukur area penghambatan tiap sumur
Ditentukan ekstrak yang akan diuji nilai MIC Kultur mikroba yang telah disegarkan
Lubang A Lubang B
Lubang D Lubang C
73
Lampiran 4. Contoh perhitungan penentuan jumlah mikroba
Jumlah mikroba umur 24 jam = 10
8
selml NB. Jumlah sel yang diinginkan dalam agar NA = 10
5
selml agar Jumlah agar dalam 1 cawan = 25 ml
Jumlah NB yang mengandung 10
8
sel yang dimasukkan = 10
5
sel ml NA x 25 ml NA 10
8
sel ml NB = 25 x 10
-3
ml NB = 25 µl NB
74
Lampiran 5. Hasil uji konfirmasi metode hitungan cawan
Jenis bakteri Jumlah sel bakteri yang
digunakan saat pengujian Bacillus cereus
2.1 x 10
8
Escherichia coli 3.9 x 10
8
Salmonella Typhimurium 6.2 x 10
8
Pseudomonas aeroginosa 4.1 x 10
8
Staphylococcus aureus 4.2 x 10
8
75
77
Lampiran 8. Contoh perhitungan rendemen
• Rendemen ekstrak etanol Bobot jintan hitam halus = 34.58 gr
Bobot ekstrak etanol pekat = 2.9005 gr Rendemen ekstrak etanol = Bobot ekstrak etanol pekat x 100
Bobot jintan hitam halus = 2.900534.58 x 100
= 8.39
• Rendemen ekstrak etil asetat Bobot ampas ekstrak heksan = 18.60 gr
Bobot ekstrak etil asetat pekat = 0.9454 gr Rendemen ekstrak etil asetat = Bobot ekstrak etil asetat pekat x 100
Bobot ampas ekstrak heksan = 0.945418.60 x 100
= 5.08
• Rendemen ekstrak metanol Bobot ampas ekstrak etil asetat = 21.92 gr
Bobot ekstrak metanol pekat = 1.8855 gr Rendemen ekstrak metanol = Bobot ekstrak metanol pekat x 100
Bobot ampas ekstrak etil asetat = 1.885521.92 x 100
= 8.60
78
Lampiran 9. Hasil penghitungan standar eror SE
Mikroba Simbol
Bacillus cereus 1
Escherichia coli 2
Salmonella Typhimurium 3
Pseudomonas aeroginosa 4
Staphylococcus aureus 5
Ek st r ak ai r 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 1 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 2 1. 6500000 0. 1500000
MI KROBA2 2 0 0 MI KROBA3 2 0 0
MI KROBA4 2 2. 9250000 0. 0250000 MI KROBA5 2 3. 3700000 0. 1900000
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 2
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 2 5. 3150000 0. 1350000 MI KROBA2 2 1. 6700000 0. 0200000
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 3
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA3 3 5. 2000000 0. 1903506 MI KROBA4 3 7. 0533333 0. 2167436
MI KROBA5 3 9. 3366667 0. 3075350 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
mi ny ak _at si r i 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 4 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 3 6. 0666667 0. 1748650
MI KROBA2 3 3. 2500000 0. 2250185 MI KROBA3 3 4. 2300000 0. 4063250
MI KROBA4 3 2. 2866667 0. 2265931 MI KROBA5 3 7. 3600000 0. 3340659
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Eks t r ak heks an 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 5
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 3 2. 0800000 0. 4600000 MI KROBA2 3 0 0
MI KROBA3 3 0 0 MI KROBA4 3 3. 7166667 0. 8264449
MI KROBA5 3 4. 0233333 0. 3608478 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Ek st r ak et i l _as et at 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 6 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 3 3. 0366667 0. 7033570
MI KROBA2 3 2. 1466667 0. 1894143 MI KROBA3 3 4. 1900000 0. 3652853
MI KROBA4 3 5. 0700000 0. 4772141 MI KROBA5 3 3. 1700000 0. 2151743
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak met anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 7
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 3 4. 1766667 0. 7096556 MI KROBA2 3 0 0
MI KROBA3 3 3. 0800000 0. 2454248 MI KROBA4 3 5. 5633333 0. 4318307
MI KROBA5 3 4. 3333333 0. 4935698 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
79
Lampiran 10. Hasil analisis ragam
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 1 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Cl ass Lev el I nf or mat i on
Cl as s Lev el s Val ues EKSTRAK 6 1 2 3 4 5 6
MI KROBA 5 1 2 3 4 5 Number of obs er vat i ons i n dat a set = 83
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 2 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Dependent Var i abl e: DI AMETER
Sour ce DF Sum of Squar es Mean Squar e F Val ue Pr F Model 29 437. 87556667 15. 09915747 37. 36 0. 0001
Er r or 53 21. 41883333 0. 40412893 Cor r ec t ed Tot al 82 459. 29440000
R- Squar e C. V. Root MSE DI AMETER Mean 0. 953366 17. 70784 0. 63571136 3. 59000000
Sour ce DF Type I SS Mean Squar e F Val ue Pr F EKSTRAK 5 175. 75671308 35. 15134262 86. 98 0. 0001
MI KROBA 4 156. 46550143 39. 11637536 96. 79 0. 0001 EKSTRAK MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001
Sour ce DF Type I I I SS Mean Squar e F Val ue Pr F EKSTRAK 5 152. 72013515 30. 54402703 75. 58 0. 0001
MI KROBA 4 158. 82907781 39. 70726945 98. 25 0. 0001 EKSTRAK MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001
80
Lampiran 11. Hasil uji lanjut Duncan
Ekstrak Simbol
Ekstrak air 1
Ekstrak etanol 2
Minyak atsiri 3
Ekstrak heksan 4
Ekstrak etil asetat 5
Ekstrak metanol 6
Mikroba Simbol
Bacillus cereus 1
Escherichia coli 2
Salmonella Typhimurium 3
Pseudomonas aeroginosa 4
Staphylococcus aureus 5
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 3 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Dunc an s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER
NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he ex per i ment wi s e er r or r at e
Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129 WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal .
Har moni c Mean of c el l s i z es = 13. 52601 Number of Means 2 3 4 5 6
Cr i t i cal Range . 4903 . 5157 . 5325 . 5446 . 5539 Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent .
Duncan Gr oupi ng Mean N EKSTRAK A 6. 0569 13 2
B 4. 6387 15 3 C 3. 5227 15 5
C 3. 4307 15 6 D 1. 9640 15 4
D 1. 5890 10 1 Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 4
08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Dunc an s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he
ex per i ment wi s e er r or r at e Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129
WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal . Har moni c Mean of c el l s i z es = 16. 58537
Number of Means 2 3 4 5 Cr i t i c al Range . 4428 . 4657 . 4808 . 4918
Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent . Duncan Gr oupi ng Mean N MI KROBA
A 5. 3771 17 5 B 4. 5247 17 4
C 3. 7506 16 1 D 2. 9471 17 3
E 1. 2206 16 2
82
Lampiran 13. Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella
Typhimurium Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 5.87 5.8
6.48 7.23 6.35
2.30 40.3225 20
8.97 8.82 8.87 8.98 8.91
3.00 79.3881
30 8.8 8.62
8.67 8.5 8.65
3.40 74.8225 40 8.55
8.58 7.43
7.6 8.04 3.69 64.6416
50 8.55 8.13 9.07 7.73
8.37 3.91
70.0569
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 15.118x + 16.537
10 20
30 40
50 60
70 80
90
1 2
3 4
5
ln konsentrasi k
u a
dr a
t z ona
ha m
b a
t mm
Kurva i Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella Typhimurium
Y = 15.118X + 16.537 Jika Y=0; X= -1.09386
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 0.3349 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.250.3349 MIC
= 0.0837 = 0.084 ww
83
Lampiran 14. Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus
cereus Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 4.83 5.3
4.13 4.43 4.68
2.30 21.8556 20 8.8
9.77 7.9
8.2 8.67 3.00 75.1111
30 8.33 8.52
9.17 8.77 8.69
3.40 75.6175 40 11.15
11.93 10.32
10.22 10.90 3.69 118.9009
50 12.37 11.63
10.03 10.2 11.06
3.91 122.2867 Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 62.27x - 120.25 R
2
= 0.9367
20 40
60 80
100 120
140
1 2
3 4
5
ln konsentrasi k
u a
dr a
t z ona
ha mba
t m
m
Kurva ii Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus cereus Y = 62.27X – 120.25
Jika Y=0; X= 1.931106 X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 6.897138 Mt
MIC = 0.25Mt MIC = 0.256.897138
MIC
= 1.724284 = 1.72 ww
84
Lampiran 15. Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri
Staphylococcus aureus Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 3.67 3.72 4.33 3.40
3.78 2.30
14.2884 20 4.82
4.57 5.67
4.5 4.89 3.00 23.9121
30 4.63 5.15 4.45 5.63
4.96 3.40
24.6016 40 7.3
6.82 6.27
6.9 6.82 3.69 46.5124
50 9.23 7.3
7.7 7.73 7.99
3.91 63.8401 Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 27.903x - 56.322
10 20
30 40
50 60
70
1 2
3 4
5
l n k ons e nt r a s i
Kurva iii. Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Y = 27.903X – 56.322 Jika Y=0; X= 2.0185
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5269 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.257.5269 MIC
= 1.8817= 1.88 ww
85
Lampiran 16. Penentuan nilai MIC ekstrak metanol jintan hitam terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 3.23 -
4.12 - 3.68
2.30 13.5056 20
6.4 6.52 6.37 6.27 6.32
3.00 39.9424
28 8.83 7.55
7.37 - 7.78
3.33 60.5284
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 44.719x - 90.375 R
2
= 0.9891
10 20
30 40
50 60
70
0.5 1
1.5 2
2.5 3
3.5
l n k o n se n t r a si
Kurva iv. Penentuan nilai MIC ekstrak methanol jintan hitam terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa
Y = 44.719X - 90.375 Jika Y=0; X= 2.0209
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5455 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.257.5455 MIC
= 1.8864 = 1.88 ww
86
76
Lampiran 1.
Skema tahapan penelitian
Digiling
Didistilasi uap
Ulangan
Direfluks dengan pelarut air
Ulangan
Direfluks dengan pelarut etanol
100 ºC, 2 jam
100 ºC, 3 jam
80 ºC, 2 jam
80 ºC, 3 jam Disaring
Disaring Direfluks dengan pelarut organik
heksana, etil asetat, metanol 60 ºC, 3 jam dan 2 jam
dikeringkan dikeringkan
oven vakum oven vakum Dihembus gas N
2
Ditimbang Jintan hitam
Bubuk jintan hitam
Minyak atsiri Komponen volatil
Ampas Komponen non-volatil
Ekstrak Ampas
Ampas Ekstrak
• Dianalisa aktivitas antimikroba
• Dianalisa kualitatif komponen
alkaloid, flavonoid,
terpenoidsteroid, saponin, tanin
Ekstrak heksan, ekstrak metanol, ekstrak etil asetat
Ekstrak pekat Ekstrak pekat
• Dianalisa aktivitas antimikroba • Dianalisa kualitatif komponen alkaloid,
flavonoid, terpenoidsteroid, saponin, tanin • Dianalisa aktivitas antimikroba
• Dianalisa kualitatif komponen alkaloid, flavonoid, terpenoidsteroid, saponin, tanin
71
Lampiran 2. Diagram alir persiapan kultur bakteri dan uji konfirmasi jumlah mikroba
Diambil satu ose Dimasukkan ke dalam 10 ml NB steril
Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC Diambil 1 ml
Dimasukkan ke dalam 9 ml NB steril Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC
Diamati kekeruhannya Keruh Agak bening
Dipipetl 1 ml Dipipet 1 ml Dimasukkan ke dalam
Dimasukkan ke dalam 9 ml pengencer steril 9 ml pengencer steril
Dilakukan pengenceran dari 10
1
-10
8
Dilakukan pengenceran dari 10 -10
5
Dipipet masing-masing 1ml Dipipet masing-masing 1 ml dari pengenceran 10
5
-10
8
dari pengenceran 10 -10
5
Masing-masing dimasukkan Masing-masing dimasukkan
ke dalam cawan petri steril ke dalam cawan petri steril Dituang agar
Didiamkan hingga agar membeku Diinkubasi 48 jam, 37 ºC
Diamati dan dihitung jumlah koloni Ditentukan jumlah µl NB yang akan dimasukkan
ke dalam 25 ml NA cair
A
Kultur bakteri
72
Lampiran 3. Diagram alir uji difusi sumur
Dipipet sejumlah A sesuai hasil pada persiapan kultur
Dimasukkan ke dalam botol berisi 25 ml NA cair steril Dituang ke dalam cawan petri steril
Dibiarkan beku Dibuat 4 lubangsumur
Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl DMSO lar antibiotik sampel sampel
Diinkubasi 37 ºC, 24 jam Diamati dan diukur area penghambatan tiap sumur
Ditentukan ekstrak yang akan diuji nilai MIC Kultur mikroba yang telah disegarkan
Lubang A Lubang B
Lubang D Lubang C
73
Lampiran 4. Contoh perhitungan penentuan jumlah mikroba
Jumlah mikroba umur 24 jam = 10
8
selml NB. Jumlah sel yang diinginkan dalam agar NA = 10
5
selml agar Jumlah agar dalam 1 cawan = 25 ml
Jumlah NB yang mengandung 10
8
sel yang dimasukkan = 10
5
sel ml NA x 25 ml NA 10
8
sel ml NB = 25 x 10
-3
ml NB = 25 µl NB
74
Lampiran 5. Hasil uji konfirmasi metode hitungan cawan
Jenis bakteri Jumlah sel bakteri yang
digunakan saat pengujian Bacillus cereus
2.1 x 10
8
Escherichia coli 3.9 x 10
8
Salmonella Typhimurium 6.2 x 10
8
Pseudomonas aeroginosa 4.1 x 10
8
Staphylococcus aureus 4.2 x 10
8
75
77
Lampiran 8. Contoh perhitungan rendemen
• Rendemen ekstrak etanol Bobot jintan hitam halus = 34.58 gr
Bobot ekstrak etanol pekat = 2.9005 gr Rendemen ekstrak etanol = Bobot ekstrak etanol pekat x 100
Bobot jintan hitam halus = 2.900534.58 x 100
= 8.39
• Rendemen ekstrak etil asetat Bobot ampas ekstrak heksan = 18.60 gr
Bobot ekstrak etil asetat pekat = 0.9454 gr Rendemen ekstrak etil asetat = Bobot ekstrak etil asetat pekat x 100
Bobot ampas ekstrak heksan = 0.945418.60 x 100
= 5.08
• Rendemen ekstrak metanol Bobot ampas ekstrak etil asetat = 21.92 gr
Bobot ekstrak metanol pekat = 1.8855 gr Rendemen ekstrak metanol = Bobot ekstrak metanol pekat x 100
Bobot ampas ekstrak etil asetat = 1.885521.92 x 100
= 8.60
78
Lampiran 9. Hasil penghitungan standar eror SE
Mikroba Simbol
Bacillus cereus 1
Escherichia coli 2
Salmonella Typhimurium 3
Pseudomonas aeroginosa 4
Staphylococcus aureus 5
Ek st r ak ai r 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 1 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 2 1. 6500000 0. 1500000
MI KROBA2 2 0 0 MI KROBA3 2 0 0
MI KROBA4 2 2. 9250000 0. 0250000 MI KROBA5 2 3. 3700000 0. 1900000
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 2
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 2 5. 3150000 0. 1350000 MI KROBA2 2 1. 6700000 0. 0200000
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 3
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA3 3 5. 2000000 0. 1903506 MI KROBA4 3 7. 0533333 0. 2167436
MI KROBA5 3 9. 3366667 0. 3075350 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
mi ny ak _at si r i 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 4 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 3 6. 0666667 0. 1748650
MI KROBA2 3 3. 2500000 0. 2250185 MI KROBA3 3 4. 2300000 0. 4063250
MI KROBA4 3 2. 2866667 0. 2265931 MI KROBA5 3 7. 3600000 0. 3340659
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Eks t r ak heks an 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 5
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 3 2. 0800000 0. 4600000 MI KROBA2 3 0 0
MI KROBA3 3 0 0 MI KROBA4 3 3. 7166667 0. 8264449
MI KROBA5 3 4. 0233333 0. 3608478 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Ek st r ak et i l _as et at 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 6 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - MI KROBA1 3 3. 0366667 0. 7033570
MI KROBA2 3 2. 1466667 0. 1894143 MI KROBA3 3 4. 1900000 0. 3652853
MI KROBA4 3 5. 0700000 0. 4772141 MI KROBA5 3 3. 1700000 0. 2151743
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ek st r ak met anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 7
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
MI KROBA1 3 4. 1766667 0. 7096556 MI KROBA2 3 0 0
MI KROBA3 3 3. 0800000 0. 2454248 MI KROBA4 3 5. 5633333 0. 4318307
MI KROBA5 3 4. 3333333 0. 4935698 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
79
Lampiran 10. Hasil analisis ragam
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 1 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Cl ass Lev el I nf or mat i on
Cl as s Lev el s Val ues EKSTRAK 6 1 2 3 4 5 6
MI KROBA 5 1 2 3 4 5 Number of obs er vat i ons i n dat a set = 83
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 2 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Dependent Var i abl e: DI AMETER
Sour ce DF Sum of Squar es Mean Squar e F Val ue Pr F Model 29 437. 87556667 15. 09915747 37. 36 0. 0001
Er r or 53 21. 41883333 0. 40412893 Cor r ec t ed Tot al 82 459. 29440000
R- Squar e C. V. Root MSE DI AMETER Mean 0. 953366 17. 70784 0. 63571136 3. 59000000
Sour ce DF Type I SS Mean Squar e F Val ue Pr F EKSTRAK 5 175. 75671308 35. 15134262 86. 98 0. 0001
MI KROBA 4 156. 46550143 39. 11637536 96. 79 0. 0001 EKSTRAK MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001
Sour ce DF Type I I I SS Mean Squar e F Val ue Pr F EKSTRAK 5 152. 72013515 30. 54402703 75. 58 0. 0001
MI KROBA 4 158. 82907781 39. 70726945 98. 25 0. 0001 EKSTRAK MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001
80
Lampiran 11. Hasil uji lanjut Duncan
Ekstrak Simbol
Ekstrak air 1
Ekstrak etanol 2
Minyak atsiri 3
Ekstrak heksan 4
Ekstrak etil asetat 5
Ekstrak metanol 6
Mikroba Simbol
Bacillus cereus 1
Escherichia coli 2
Salmonella Typhimurium 3
Pseudomonas aeroginosa 4
Staphylococcus aureus 5
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 3 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996
Gener al Li near Model s Pr oc edur e Dunc an s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER
NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he ex per i ment wi s e er r or r at e
Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129 WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal .
Har moni c Mean of c el l s i z es = 13. 52601 Number of Means 2 3 4 5 6
Cr i t i cal Range . 4903 . 5157 . 5325 . 5446 . 5539 Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent .
Duncan Gr oupi ng Mean N EKSTRAK A 6. 0569 13 2
B 4. 6387 15 3 C 3. 5227 15 5
C 3. 4307 15 6 D 1. 9640 15 4
D 1. 5890 10 1 Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 4
08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Dunc an s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he
ex per i ment wi s e er r or r at e Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129
WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal . Har moni c Mean of c el l s i z es = 16. 58537
Number of Means 2 3 4 5 Cr i t i c al Range . 4428 . 4657 . 4808 . 4918
Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent . Duncan Gr oupi ng Mean N MI KROBA
A 5. 3771 17 5 B 4. 5247 17 4
C 3. 7506 16 1 D 2. 9471 17 3
E 1. 2206 16 2
82
Lampiran 13. Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella
Typhimurium Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 5.87 5.8
6.48 7.23 6.35
2.30 40.3225 20
8.97 8.82 8.87 8.98 8.91
3.00 79.3881
30 8.8 8.62
8.67 8.5 8.65
3.40 74.8225 40 8.55
8.58 7.43
7.6 8.04 3.69 64.6416
50 8.55 8.13 9.07 7.73
8.37 3.91
70.0569
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 15.118x + 16.537
10 20
30 40
50 60
70 80
90
1 2
3 4
5
ln konsentrasi k
u a
dr a
t z ona
ha m
b a
t mm
Kurva i Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella Typhimurium
Y = 15.118X + 16.537 Jika Y=0; X= -1.09386
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 0.3349 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.250.3349 MIC
= 0.0837 = 0.084 ww
83
Lampiran 14. Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus
cereus Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 4.83 5.3
4.13 4.43 4.68
2.30 21.8556 20 8.8
9.77 7.9
8.2 8.67 3.00 75.1111
30 8.33 8.52
9.17 8.77 8.69
3.40 75.6175 40 11.15
11.93 10.32
10.22 10.90 3.69 118.9009
50 12.37 11.63
10.03 10.2 11.06
3.91 122.2867 Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 62.27x - 120.25 R
2
= 0.9367
20 40
60 80
100 120
140
1 2
3 4
5
ln konsentrasi k
u a
dr a
t z ona
ha mba
t m
m
Kurva ii Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus cereus Y = 62.27X – 120.25
Jika Y=0; X= 1.931106 X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 6.897138 Mt
MIC = 0.25Mt MIC = 0.256.897138
MIC
= 1.724284 = 1.72 ww
84
Lampiran 15. Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri
Staphylococcus aureus Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 3.67 3.72 4.33 3.40
3.78 2.30
14.2884 20 4.82
4.57 5.67
4.5 4.89 3.00 23.9121
30 4.63 5.15 4.45 5.63
4.96 3.40
24.6016 40 7.3
6.82 6.27
6.9 6.82 3.69 46.5124
50 9.23 7.3
7.7 7.73 7.99
3.91 63.8401 Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 27.903x - 56.322
10 20
30 40
50 60
70
1 2
3 4
5
l n k ons e nt r a s i
Kurva iii. Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Y = 27.903X – 56.322 Jika Y=0; X= 2.0185
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5269 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.257.5269 MIC
= 1.8817= 1.88 ww
85
Lampiran 16. Penentuan nilai MIC ekstrak metanol jintan hitam terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa Konsentrasi
ww Diameter penghambatan
mm Rata-rata
diameter penghambatan
mm Ln
konsentrasi Kuadrat zona
penghambatan mm
2
Ulangan 1 Ulangan 2
10 3.23 -
4.12 - 3.68
2.30 13.5056 20
6.4 6.52 6.37 6.27 6.32
3.00 39.9424
28 8.83 7.55
7.37 - 7.78
3.33 60.5284
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan mm
2
dan X = Ln konsentrasi
y = 44.719x - 90.375 R
2
= 0.9891
10 20
30 40
50 60
70
0.5 1
1.5 2
2.5 3
3.5
l n k o n se n t r a si
Kurva iv. Penentuan nilai MIC ekstrak methanol jintan hitam terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa
Y = 44.719X - 90.375 Jika Y=0; X= 2.0209
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5455 Mt MIC = 0.25Mt
MIC = 0.257.5455 MIC
= 1.8864 = 1.88 ww
86
76
65
DAFTAR PUSTAKA
Achyad, D. E. dan R. Rasyidah. 2000. Jintan Hitam Nigella sativa L.. www.asiamaya.com. [20 Januari 2006].
Adawiyah, D. R. 1998. Kajian pengembangan metode ekstraksi komponen antimikroba biji buah atung Parinarium glaberium Hassk.. Tesis.
Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Ahmad, I. dan A. Z. Beg. 2001. Antimicrobial and phytochemical studies on 45
Indian medicinal plants against multi-drug resistant human pathogens. Journal of Ethnopharmacology. 74:113-123.
Ahmad, I., Z. Mehmood, dan F. Mohammad. 1998. Screening of some Indian medicinal plants for their antimicrobial properties. Journal of
Ethnopharmacology. 62:183-193. Al-hebshi, N., M. Al-haroni, dan N. Skaug. 2005. In vitro antimicrobial and
resistance-modifying activities of aqueous crude khat extracts against oral microorganisms. Archives of Oral Biology.
www.bora.uib.nobitstream. [12
Agustus 2006]. Aligiannis, N., E. Kalpoutzakis, S. Mitaku, dan I. B. Chinou. 2001. Composition
and antimicrobial activity of the essential oils of two Origanum spesies. Journal of Agricultural Food Chemistry. 49:4168-4170.
Al-Jabre, S., O. M. Al-Akloby, A. R. Al-Qurashi, N. Akhtar, A. Al-Dossary, dan M. A. Randhawa. 2003. Thymoquinone, an active principle of Nigella
sativa , inhibited Aspergillus niger. Pakistan Journal Medical Research, 42
3. www.pmrc.org.pk. [15 Agustus
2006]. Al-Saleh, I. A., G. Billedo, dan I. I. El-Doush. 2006. Levels of selenium, DL-
α- tocopherol, DL- -tocopherol, all-trans-retinol, thymoquinone and thymol
in different brands of Nigella sativa seeds. Journal of Food Composition and Analysis. 19:167-175.
Anonim. 2006
a
. Nigella sativa. www.en.wikipedia
.com. [13 Maret 2006]. Anonim. 2006
b
. Chemical analysis of Black seed Oil. www.blackseed.com. [20 Maret 2006].
Anonim. 2006
c
. Essential Oil. www.wikipedia.com
. [9 November 2006]. Apriantono, A., D. Fardiaz, N. L. Puspitasari, S. Yasni dan S. Budiyanto. 1989.
Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Bogor, IPB Press.
66 Ardiansyah. 2001. Teknik ekstraksi komponen antimikroba andaliman
Zanthoxylum acanthopodicum dan antarasa Litsea cubeba. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Babayan, V. K., D. Koottungal dan G. A. Halaby. 1978. Proximate analysis, fatty acid and amino acid composition of Nigella sativa L. seeds. Journal of
Food Science. 43:1314-1315. Badan Pengawas Obat dan Makanan RI Badan POM RI. 2005. Foodwatch
Sistem Keamanan Pangan Terpadu. Sekretariat Jenderal Jejaring Intelijen Pangan, Jakarta.
Baird-Parker, T. C. 2000. Staphylococcus aureus. Di dalam : Lund, B. M., Baird- Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological Safety and
Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Belitz, H. D. dan W. Grosch. 1999. Food Chemistry. Springer-Verlag, Berlin.
Bloomfield, S. F. 1991. Methods for assesing antimicrobial activity. Di dalam
Denyer S. P. dan W. B. Hugo. eds.. Mechanism of Action of Chemical Biocides their Study and Exploitation. Blackwell Scientific Publication,
London. Branen A. L. dan P. J. Davidson. 1993. Antimicrobials in Foods. Marcel Dekker,
New York. Cahattopadhyay, D., K. Maiti, A. P. Kundu, M. S. Chakraborty, R. Bhadra, S. C.
Mandal, dan A. B. Mandal. 2001. Antimicrobial activity of Alstonia macrophylla
: a folklore of bay islands. Journal of Ethnopharmacology. 77:49-55.
Coconut Coast Handmade Soap Co. 2006. Steam Distillation. www.ccnphawaii.com.htm. [20 September 2006].
D’Aoust J. Y. 2000. Samonella. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological Safety and Quality of Food.
Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Donmez, A. A. dan B. Mutlu. 2004. A new species of Nigella Ranunculaceae
from Turkey. Botanical Journal of the Linnean Society. 146 : 251-255. Dorman H. J. D. dan S. G. Deans. 2000. Antimicrobial agents from plants :
antibacterial activity of plant volatile oils. Journal of Applied Microbiology. 88 : 308-316.
Faizi S, R. A. Khan, S. Azher, S. A. Khan, S. Tauseef, dan A. Ahmad. 2003. New antimicrobial alkaloids from the roots of Polyalthia longifolia var.
pendula. Planta Medical. 69:350—5.
67 Fardiaz, S., Suliantari, dan R. Dewanti. 1987. Bahan Pengajaran Senyawa
Antimikroba. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor. Fardiaz, S. 1989. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan. Pusat Antar
Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor. -------------. 1992. Mikrobiologi Pangan. Gramedia, Jakarta.
Garigga, M., M. Hugas, T. Aymerich dan J. M. Monfort. 1993. Bacteriocinogenic
Activity of Lactobacilli from Fermentation Sausages. Journal of Applied Microbiology. 7:142-148.
Granum, P. E. dan T. C. Baird-Parker. 2000. Bacillus species. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The Microbiological
Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Harbone, J.B. 1996. Metode Fitokimia. Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Terjemahan. K. Padmawinata dan I. Soediro. Penerbit ITB, Bandung.
Hart, H. 1983. Kimia Organik : Suatu kuliah singkat. Terjemahan. S. Achmadi. Penerbit Erlangga, Jakarta.
Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid II. Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta.
Hinton, A. dan K. D. Ingram. 2000. Use of oleic acid to reduce the population of the bacterial flora of poultry skin. Journal Food Protection. 9:1282-1286.
Hirasa, K. dan M. Takemasa. 1998. Spice Science and Technology. Marcell Dekker, Inc., New York.
Houghton P. J. dan A. Raman. 1998. Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural Extracts. Chapman and Hall, London.
Hu J. P. , N. Takahashi, dan T. Yamada. 2000. Coptidis rhizoma inhibits growth and proteases of oral bacteria. Oral Dis. 6:297—302.
Hutapea, J. R. 1994. Inventaris Tanaman Obat Indonesia III. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Depkes RI.
Javidnia, K., R. Miri, R. B. Najafi, dan N. K. Jahromi. 2003. A preliminary study on the biological activity of Daphne mucronata Royle. DARU, 11 1.
www.diglib.tums.ac.ir . [28 Juli 2006].
Ji, Y. L. , S. K. Yong dan H. S. Dong. 2002. Antimicrobial synergistic effect of linolenic acid and monoglyceride against Bacillus cereus and
Staphylococcus aureus . Journal Agricultural and Food Chemistry. 50 7.
68 Ketaren, S. 1987. Minyak Atsiri Jilid 1. UI Press, Jakarta.
Koster, S. K. 2001. Distillation. www.ulwax.edu.htm
. [20 September 2006]. Lambert, R. J. W., P. N. Skandamis, P. J. Coote, dan G. J. E. Nychas. 2001. A
study of the minimum inhibitory concentration of action oregano essential oil, thymol and carvacrol. Journal of Applied Microbiology. 91:453-462.
Leelapornpisid, P., S. Chansakao, T. Ittiwittayawat, S. Pruksakorn. 2006. Antimicrobial activity of herbal extracts on Staphylococus aureus and
Propionibacterium acnes . www. actahort.com.
Lund, B. M., T. C. Baird-Parker, dan G. W. Gould. 2000. The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Mattjik, A. A. dan M. Sumertajaya. 2000. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab. IPB Press, Bogor.
Mashhadian, N. V. dan H. Rakhshandeh. 2005. Antibacterial and antifungal effects of Nigella sativa extracts against S. aureus, P.aeroginosa, and C.
albicans . Pakistan Journal Medical Science. 21 1:47-52.
www.pjms.com .
[28 Juli 2006]. Meral, G. dan N. U. Karabay. 2002. In vitro antibacterial activities of three
hypericum species from west anatolia. Turkish Electronic Journal of Biotechnology.
http:www.biyotekder.hacettepe.edu.trdergi.html. [28 Juli
2006]. Moyler, D. A. 1994. Spices Recent Advances. Di dalam Charalambous Ed..
Spices, Herbs and Edible Fungi. Elsevier, Amsterdam. Naidu, A. S. 2000. Natural Food Antimicrobial Systems. CRC Press, New York.
Nair, R. dan S. Chanda. 2006. Activity of some medicinal plants against certain
pathogenic bacterial strains. Indian Journal of Pharmacology
. www.findarticles
.com. [28 Juli 2006]. Nikaido, H. dan M. Vaara. 1985. Molecular basis of bacterial outer membran
permeability. Microbiology Review. 49:1-32. Prescott, L. M., J. P. Harley, dan D. A. Klein. 2003. Microbiology. Mc Graw-Hill,
Singapore. Pelczar, M. J. and R. D. Reid. 1979. Microbiology. Mc. Graw Hill Book Co., New
York. Roller, S. 2003. Natural Antimicrobials for Minimal Processing of Foods. CRC
Press, New York.
69 Rota, C., J.J. Carraminana, J. Burillo, A. Herrera. 2004. In vitro antimicrobial
activity of essential oils from aromatic plants against selected foodborne pathogens. Journal of Food protection. 67:1252-1256.
Scalbert, A. 1991. Antimicrobial properties of tannins. Phytochemistry Review. 30 12: 3875-3883.
Singh, G., P. Marimuthu, H. S. Murali, dan A. S. Bawa. 2005. Antioxidative and antibacterial potentials of essential oils and extracts isolated from various
spice materials. Journal of Food Safety. 25:130-145. Still, D. W. 2002. Bioengineering and Breeding Approaches. Dalam :
Phytochemicals in Nutrition and Health. Meskin, M. S, W. R Bidlack, A. J. Davies, S. T. Omeya Eds.. CRC Press, USA, pp. 122-127.
Syamani, F. A. 2001. Kajian ekstraksi oleoresin jinten hitam Nigella sativa L.. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Thongson, C., P. M. Davidson, W. Mahakarnchanakul dan J. Weiss. 2004. Antimicrobial activity of ultrasound-assisted solvent-extracted spices.
Letters in Applied Microbiology. 39:401-406. Tiwari, R. P., S. K. Bharti, H. D. Kaur, R. P. Dikshit G. S. Hoondal. 2005.
Synergistic antimicrobial activity of tea antibiotics. Indian Journal Medical Research. 122:80-84.
WHO. 2005. Food safety and foodborne illness. www.who.int.com
. [27 Maret 2006].
Willshaw, G. A., T. Cheasty, dan H. R. Smith. 2000. Escherichia coli. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould eds.. The
Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
WordNet. 2006. Extraction. www.answers.comextraction.
[20 November 2006].
.
63
V. KESIMPULAN DAN SARAN A. KESIMPULAN
Kategori