Kadar kolesterol mgdl = A sampel A standar x 200 mgdl
Keterangan : A = absorbansi
200 = Standar kolesterol murni 200 mgdl 5.2 mmoll
Tabel 10. Komposisi Reagen Kolesterol
Komponen penyusun Jumlah
Good’s buffer pH 6.7 50 mmoll
Phenol 5 mmoll
4-aminoantipyrine 0.3 mmoll
Cholesterol esterase CHE ≥ 200 UI
Cholesterol oxidase CHO ≥ 50 UI
Peroxidase POD ≥ 3 kUI
b. Analisis High Density Lipoprotein Metode CHOD-PAP
Prinsip penentuan kadar HDL adalah mengendapkan kilomikron, VLDL, dan LDL dengan menambahkan asam fosfotungstat dan ion
magnesium. Proses sentrifugasi akan meninggalkan hanya HDL dalam supernatan. Kadar HDL kemudian ditentukan secara enzimatis
menggunakan reagen kolesterol Tabel 11. Persiapan sampel serum sebelum analisis dapat dilihat pada Gambar 10 dan analisis kadar HDL
sampel dapat dilihat pada Gambar 11. 200 µl serum + 500 µl reagen presipitasi
Di vorteks Diinkubasi pada suhu kamar selama 10 menit
Sentrifuse 4000 rpm, 10 menit
Supernatan siap dianalisis
28
Perhitungan :
Kadar HDL mgdl = A sampel A standar x 200 mgdl
Keterangan : A = absorbansi
200 = Standar kolesterol murni 200 mgdl 5.2 mmoll
Tabel 11 . Komposisi Reagen Presipitasi
Komponen penyusun Jumlah
Asam fosfotungstat 1.4 mmoll
Magnesium klorida 8.6 mmoll
c. Analisis Trigliserida Metode GPO-PAP
Prinsip pengukuran kadar trigliserida adalah hidrolisis enzimatis dan oksidasi. Sampel serum direaksikan dengan reagen trigliserida Tabel 12.
Trigliserida akan dihidrolisis oleh enzim lipase menghasilkan gliserol dan asam lemak. Gliserol kemudian diubah menjadi gliserol-3-fosfat oleh
enzim gliserolkinase. Gliserol-3-fosfat yang dihasilkan dioksidasi menghasilkan dihidroksi aseton fosfat dan peroksida. Peroksida yang
dihasilkan akan bereaksi lebih lanjut dengan 4-aminofenazon dan 4- klorofenol menghasilkan senyawa quinone imine Gambar 12 yang
Gambar 10. Prosedur Persiapan Sampel Analisis Kadar HDL
100 µl standar + 1 ml reagen kolesterol Di vorteks
Diinkubasi pada suhu 37 C, 5 menit
Dibaca absorbansi pada λ 500 nm
Gambar 11. Prosedur Analisis Kadar HDL Sampel atau Standar
29
berwarna merah dan dapat diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 500 nm Gambar 13.
Trigliserida + H
2
O gliserol + asam lemak
Gliserol + ATP gliserol-3-fosfat + ADP
Gliserol-3-fosfat + O
2
dihidroksi aseton fosfat + H
2
O
2
2H
2
O
2
+ 4-aminofenazon + 4-klorofenol quinone imine
+ HCl + 4 H
2
O
Perhitungan :
Kadar Trigliserida mgdl = A sampel A standar x 200 mgdl
Keterangan : A = absorbansi
200 = Standar trigliserida murni 200 mgdl 2.3 mmoll peroksidase
lipase
gliserolkinase Gliserol 3-fosfatoksidase
10 µl serum atau standar + 1.00 ml reagen trigliserida Di vorteks
Diinkubasi pada suhu 37 C, 5 menit
Dibaca absorbansi pada λ 500 nm
Gambar 13. Prosedur Analisis Kadar Trigliserida Sampel atau Standar
Gambar 12. Reaksi-reaksi yang Terlibat dalam Analisis Trigliserida
30
Tabel 12 . Komposisi Reagen Trigliserida
Komponen penyusun Jumlah
Good’s buffer pH 7.2 50 mmoll
4-Clorophenol 4 mmoll
ATP 2 mmoll
Mg
2+
15 mmoll Glycerokinase GK
≥ 0.4 kUI Peroxidase POD
≥ 2 kUI Lipoprotein lipase LPL
≥ 2 kUI 4-aminoantipyrine
0.5 mmoll Glycerol-3-phosphate-oxidase GPO
≥ 0.5 kUI
d. Analisis Low Density Lipoprotein Friedwald et al., 1972
