diikuti dengan dehidrasi dengan etanol. Spesimen dikeringkan dalam suatu alat critical- point peralatan pengering. Sampel dilapisi dengan gold-palladium kira-kira 2-5 nm dan
dianalisa dengan SEM Han, 2010. Fourier-Transformed Infra-Red Spectroscopy FTIR, spektrum infra-red dari
scaffold dapat diperoleh dari spektrofotometer spectrum 100 PERKIN ELMER pada range 4000-650cm
-1
Film campuran kolagen-kitosan diperoleh dengan pencetakan larutan dalam plate teflon. Setelah evaporasi 24 jam pada suhu kamar, scaffold dicrosslink secara vacuum-
heating pada 105 . Dari spektrum ini dapat dilihat kemungkinan interaksi kedua
polimer dalam sampel campuran Fernandes, 2011.
o
Spectra infrared panjang gelombang 4000-600 cm C selama 48 jam. Film yang digunakan tebal 10µm. Analisa dengan
FT-IR berdasarkan pada identifikasi dari absorption bands dengan vibrasi gugus fungsional yang ditunjukkan dalam makromolekul Tangsadthakun, 2006.
-1
dari campuran film scaffold yang dicatat dengan FT-IR spectrometry model GX series, Perkin Elmer. sampel
dicampur dengan potassium bromide powder dan dikompres menjadi pellet tipis untuk uji infrared Faikrua, 2009.
2.9.6 Uji Termal dengan TGADSC Thermal Gravimetri Analysis dan Differential Scaning Calorimetry
Uji DSC dilakukan untuk menganalisa endothermic peak temperature dari scaffolds. Scaffold dipotong-potong ukuran kecil 2 mm
3
, menjadi 4-6 potongan kecil, berat kira-kira 5 mg, ditempatkan dalam pan aluminium. Analisa dilakukan dalam DSC
2010;TA Instrument, New Castle, DE dari 50
o
C-250
o
C dengan kontrol laju pemanasan 5
o
Stabilitas termal dapat diuji dengan Thermogravimetric TG dan Differential Thermogravimetric DTG. Kurva TGDTG diperoleh dalam atmosfir nitrogen,
menggunakan TGA Pyris 1 TGA PERKIN ELMER, dengan laju pemanasan 10
Cmenit. Uji dilakukan pada tiap sampel yang berbeda komposisi Tsai, 2007.
o
Cmenit, dari temperatur kamar sampai 700
o
C Fernandes, 2011
2.9.7 Uji Mekanik Tensile Strength dan Elongation
Uji Tensile Strength dan Elongation terhadap scaffold berpori menggunkan Universal testing machine model LRX; LLOYD, Paoli, PA pada kecepatan konstan
10mmmin dengan preload 0,5 N. Sampel dipotong berbentuk dog-bone mengikuti
Universitas Sumatera Utara
American Society for Testing Material ASTM D 4762-04 standard, dan setiap sampel ditimbang beratnya. Maksimum tensile strength load to fracture normal dengan berat
tiap scaffold. Sebelum mengukur tensile strength dan elongation, semua specimen direndam dalam PBS selama 30 menit pada suhu kamar. Pengujian dilakukan pada tiap
scaffold dengan komposisi yang berbeda Tsai, 2007.
2.9.8 In Vitro Collagenase Degradation uji degradasi kolagenase invitrouji
degradasi enzymatik
Dalam uji biodegradasi in vitro, scaffold kolagenkitosan yang dicross-linked dengan GA dengan variasi konsentrasi yang berbeda 0-0,25, dilakukan dengan
diggested kolagenase. Setiap jenis scaffold dibenamkan dalam phosphate buffered saline PBS, pH 7,4 yang mengandung 100 µgml 28 unit kolagenase tipe I, Sigma pada
37
o
C selama 4, 16, 24 dan 48 jam. Degradasi dihentikan pada interval waktu yang dikehendaki dengan menginkubasi campuran uji dalam ice bath segera. Setelah
sentrifugasi pada 1500 rpm selama 10 menit, supernatan yang bersih dihidrolisis dengan HCl 6M pada 120
o
Sampel scaffold diinkubasi pada 37 C selama 12 jam. Kandungan hydroxyproline yang dihilangkan dari
scaffold diukur dengan spektroskopi ultraviolet. Tingkat biodegradasi ditentukan sebagai persentase hydroxyproline yang dihilangkan dari scaffold pada waktu yang berbeda
sampai satu terdegradasi lengkap dengan komposisi dan berat yang sama Ma, 2003.
o
C dalam 10 ml larutan PBS pH=7,4 yang mengandung collagenase pada konsentrasi 200U5 g dari kolagen. Semua supernatan
diambil setelah inkubasi 2,4,6,16,24, 48 dan 168 jam. Supernatan yang dikumpulkan dihidrolisa dengan 6M hydrochloric acid pada 120
o
Test biodegradasi invitro dari scaffold dengan dan tanpa penambahan asam amino sebagai jembatan crosslingking terjadi dengan lysozyme digestion. Scaffold direndam
dalam PBS pH 7,4 mengandung 0,5 mgmL lysozyme L6876; Sigma-aldrich pada 37
C selama 12 jam. Konsentrasi hydroxyproline Hyp dihitung dengan uv spectrophotometer Cary 1 E, varian Inc., Palo
Alto pada panjang gelombang 202 nm. Jumlah Hyp yang dilepaskan tiap waktu dihitung sebagai persentase dari jumlah awal hyp dalam scaffold Faikrua, 2009.
o
C diatas orbital shaker dengan kecepatan 100 rpm selama 1,2,3 dan 4 minggu. Pada akhir tiap periode scaffold dikeringkan pada 50
o
C selama 12 jam, dan kemudian ditimbang. Lima sampel dihitung untuk tiap scaffold. Berat yang dikandung scaffold
diperoleh dengan persamaan 2.7 berikut ini:
Universitas Sumatera Utara
Remaining weight = WW
i
x 100 …………… 2.7
dimana W
i
Scaffold yang sudah ditimbang berat keringnya disterilisasi dengan merendam dalam ethanol 70 dan diolah dalam PBS pH 7,4 pada 37
berat kering awal dan W berat kering setelah degradasi enzymatik Tsai, 2007.
o
C mengandung 1,6 µgml 112 unitsml lysozyme hen egg-white. Konsentrasi dari lysozyme yang digunakan
berhubungan dengan konsentrasi human serum. larutan lysozyme direfresh setiap hari untuk memastikan aktivitas enzyme secara rutin. Setelah 7, 14, 21 dan 28 hari, sampel
dipindahkan dari medium, dibilas dengan distilled water, dibekukan, diliofilisasi dan ditimbang. Uji dilakukan triplicate untuk tiap scaffold. Tingkat degradasi dihitung sebagai
persentase berat yang dikandung scaffold kering setelah diolah dengan lysozyme. Untuk memisahkan antara degradasi enzymatik dan dissolution terputusnya, sampel kontrol
disimpan selama 28 hari dibawah kondisi yang sama tanpa penambahan lysozyme. Persentase dari berat yang dikandung dihitung menggunakan persamaan 2.8 berikutini:
Berat yang terkandung = W
i
-W
f
W
i
x 100 …………… 2.8
dimana Wi merupakan berat awal scaffold dan Wf berat scaffold setelah diolah digested Tangsadthakun, 2006.
2.9.9 Observasi Histologi dan Immunohistochemistry
