BAB 3 METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Penelitian FMIPA USU, Laboratorium Farmasi USU, Laboratorium Teknik Metalurgi UI Depok, Jakarta, dan
Laboratorium Skin Culture PT. Kimia Farma Pusat, Jakarta. Waktu pelaksanaan penelitian mulai Bulan November 2011 sampai dengan Bulan November 2012.
3.1 Bahan-Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah: Tabel 3.1 Bahan-bahan untuk pembuatan scaffold
No. Bahan-bahan
JenisMerk
1. Kitosan
Dari Cangkang Belangkas, DD 90,2,
Laboratorium Penelitian FMIPA USU.
2. Collagen Bovine 1
DSM Nutritional Products Ltd. 3.
Asam asetat glacial Analytical grade 0,5M, VWR, Int.
4. Glutaraldehide
0,25 dalam ddH
2
O, Shanghai Pharm.Co
China
5. Aqua bides
Tabel 3.2 Bahan-bahan untuk uji biologi kultur sel
No. Bahan-bahan
Jenis
1. Phospate Buffer Saline PBS,
tanpa Ca
2+
dan Mg Sigma Aldrich, St. Louis, MO.
2+
2. Hank’s Balanced Salt Solution
HBSS, dengan dan tanpa Ca
2+
dan Mg Sigma Aldrich, St. Louis, MO.
2+
3. PenicillinStreptomycin
Gibco Cat. No.15070-063 4.
Antimycotic amphotericin B solution
5. TrypsinEDTA
0,25 wv, Gibco Cat.No.25200-072 6.
TrypsinEDTA 0,05 wv0,53 mM
Universitas Sumatera Utara
7. Epilife, untuk sel keratinosit.
Invitrogen 8.
Modification of Eagle’s medium
α-MEM, untuk sel fibroblast.
Gibco Cat. No.11885-084
9. Fetal Bovine Serum FBS
Ultroser G Gibco Cat. No.16000-044
10. ddH
2
Oglass distilled H
2
OMilli-Q tissue culture grade H
2
O 11.
Epidermal Growth Factor EGF 10 ugmL
R D System Cat. No. 236-EG
12. L-Glutamin, 200 mM
13. Collagen tipe
IVLamininFibronectine 14. Trypan Blue
Sigma Cat. T8154 15.
Dispase I, II 16.
Stemline 17.
Gentamicine 18.
Etanol 70 19.
Collagenase 100µgml, 28 units, Type I, Sigma
20. Lisozyme
21. HCl 6M
22. Betadine
3.2 Peralatan
Peralatan yang digunakan untuk melakukan penelitian ini terdiri dari: Tabel 3.3 Peralatan untuk persiapan scaffold kolagenkitosan
No. Nama alat
JenisMerk
1. Peralatan gelas
Pyrex 2.
Cetakan kaca 7cm x 7cm x 5 mm. 3.
Freeze dryer Heyto Layolab
4. Pengaduk
Universitas Sumatera Utara
5. Centrifuge
Hettich type EBA 20
Tabel 3.4 Peralatan untuk kultur sel
No. Nama Alat
JenisMerk Ruang Persiapan
1. Oven Sterilisasi Panas
Memmert model 100-800 2.
Water Bath Polyscience
3. Micropipet 1000 µL
Soccorex 4.
Micropipet 1-10µL, 20µL, 100µL, 1000 µL
Ependorf
5. Rak Micropipet
Soccorex 6.
Hot plate stirrer GSA Type MS-H-Pro
7. Timbangan analitik
Kem Type ABJ 220-4M 8.
pH Meter Orion 3 Star
9. Centrifuge
Hettich type EBA 20 10.
Autoclave All American No. 75X
11. Vortex Mixer
Digisystem VM-1000 12.
Refrigerator GEA
13. Osmometer
Slamet 14.
Cawan kultur jaringan 35, 60, 100, 150 mm
15. Cawan petri 100 mm
16. Scalpel
17. Pinset
18. Gunting
19. Cell strainer 70 µm
20. Disposable sterile filter system 0,22
µm, 500 mL 21.
Falcon tube 15, 50 mL
Ruang Steril
1. Biohazard Safety Cabinet BSC
Esco 2.
Incubator CO
2,
37
o
New Brunswick CO170 C, kelembaban
Universitas Sumatera Utara
90, 5 CO
2
3. Mikroskop Axio Observer A1+
Camera Axio Zeis
4. Komputer + Monitor
HP Hewlet Packard 5.
Tabung gas CO
2
6. Microcentrifuge
Hettich type 200R 7.
Hemocytometer
Ruang Antara
1. Lemari gantung besi
Lion 2.
Lemari box besi tempat baju lab, masker, sarung tangan, tutup kepala.
Lion
1. Pengamatan FTIR Fourier-Transformed Infra-Red Spectroscopy FTIR, spektrum infra-red dari scaffold
dapat diperoleh dari spektrofotometer spectrum 100 PERKIN ELMER.
2. Pengamatan mikrostruktur Scanning Electron Microscopy SEM, Cambridge stereoscan 260.
3. Pengamatan degradasi termal Thermogravimetri Analisys TGA atau Differensial Scanning Calorimetri DSC
2010; TA Instrument, New Castle, DE. 4.
Uji pertumbuhan sel di atas scaffold Mikroskop inverted.
3.3 Variabel Penelitian
Kategori