45 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB IV HASIL DAN PEMAHASAN
4.1 Analisa Profil Protein dengan SDS PAGE
Protein dibentuk dari susunan asam amino yang dihubungkan oleh ikatan peptida.
Gambar 12. Pembentukan ikatan peptida
Ikatan peptida terbentuk oleh asam amino yang berikatan dengan asam amino lainnya. Atom H dari gugus amina berikatan dengan atom OH dari
gugus hidroksil menghasilkan air. Enzim pepsin sebagai biokatalisator akan mengkatalis pemotongan
ikatan peptida tersebut. Pepsin akan memecah molekul protein menjadi polipeptida yang lebih kecil dengan memutus ikatan peptida yang ada pada
sisi NH
2
bebas dari asam-asam amino aromatik fenilalanin, tirosin dan triptofan, hidrofobik Leusin, isoleusin dan metionin, atau dikarboksilat
glutamat dan aspartat. Kondisi lingkungan kerja enzim dibuat sedemikian dengan tujuan mendapatkan kinerja optimal dari enzim
tersebut. Analisa profil protein dilakukan menggunakan SDS-PAGE
Sodium Dodecyl Sulphate Poly Acrylamide Gel Electrophoresis berdasarkan pemisahan protein yang telah dihidrolisis pada kondisi pH 4,5
dan temperatur 60°C selama 1 jam. Metode ini akan memisahkan protein sesuai
dengan berat
molekulnya. Metode
elektroforesis tidak
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
mempengaruhi struktur biopolimer dan sensitif terhadap perbedaan muatan dan berat molekul yang cukup kecil. Hammes, B. D. 1998.
Protein akan bergerak dalam satu medium yang mengandung medan listrik dan menyebabkan protein bermuatan tersebut bergerak dalam medium
yang disebabkan perbedaan polaritas. Mobilitas molekul protein dipengaruhi beberapa faktor diantaranya bentuk molekul, ukuran molekul,
konsentrasi gel, waktu elektroforesis dan voltase elektroforesis yang digunakan dalam gel.
Elektroforesis diatur dengan tegangan 150 v dan arus sebesar 40 mA. Pengaturan ini dapat dimodifikasi sesuai dengan keperluan.
Pengaturan tersebut dipilih karena memberikan hasil yang paling baik diantara percobaan-percobaan yang telah dilakukan. Sumber arus listrik
yang stabil diperlukan untuk menghasilkan aliran listrik dengan voltase yang konstan. Larutan buffer kemudian dialirkan kedalam tangki
penyangga untuk menggantikan air yang hilang, dan ini mengakibatkan pergeseran pita
–pita. Pemanasan yang berlebih menyebabkan senyawa- senyawa terdenaturasi. Metode
–metode pendinginan medium pemisahan dapat dilakukan, sehingga kekuatan medan 100Vcm dapat digunakan.
Keuntungan elektroforesis pada voltase tinggi adalah terjadinya pemisahan yang cepat Bintang, 2010.
Setelah marker, standar dan sampel dielektroforesis didapatkan hasil berupa lembaran gel, kemudian lembaran gel tersebut diwarnai
dengan Bromophenol Blue dan diinterpretasikan dengan scaner. Setelah didapatkan hasil gambar dalam bentuk soft copy, kemudian diukur panjang
tracking pita dari atap sumuran sampai dasar sumuran, jarak tracking tiap band dari atap sumuran sampai tiap-tiap pita yang terdeteksi dihitung
dengan rumus persamaan regresi linear untuk mengetahui berat molekul pada masing-masing band pita protein.
Pada penelitian ini sampel terdiri dari dua produk gummy vitamin c yang berbeda, marker protein serta gelatin standar dan simulasi. Urutan
memasukan kedalam kolom adalah sebagai berikut marker kolom satu,
Kategori