Elektroforesis Analisa Profil Gelatin Hasil SDS-PAGE

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta standar gelatin sapi kolom dua, standar gelatin babi kolom tiga, simulasi gummy sapi kolom empat, simulasi gummy gelatin babi kolom lima, sampel gummy A kolom enam, sampel gummy B kolom tujuh dan standar gelatin sapi tanpa hidrolisis enzim kolom delapan. Dari hasil penelitian diperoleh pita dari masing-masing sampel gelatin gummy dan gelatin simulasi. Kemudian dilakukan skrining pita- pita protein untuk ditentukan nilai faktor retensi Rf dan berat molekulnya BM. Penentuan nilai Rf dari pita marker protein dihitung dengan cara membagi jarak pita jarak dari sumuran sampai ke pita dengan batas akhir garis elektroforesis. Terbentuk 9 pita marker protein dengan berat molekul 200 KDa, 116 KDa, 97,4 KDa, 66 KDa, 45 KDa, 31 KDa, 21.5 KDa dan 14.5 KDa. Berat molekul marker protein yang telah diketahui kemudian dihitung nilai BM-nya. Perhitungan logaritma BM dan nilai Rf dapat dilihat pada tabel 3 dan hasil elektroforesis marker protein dan protein sampel dapat dilihat pada gambar 13. Gambar 13. Hasil elektroforesis marker protein dan sampel. Keterangan gambar. M = Marker, 1 = Standar gelatin sapi, 2 = Standar gelatin babi, 3 = Simulasi gummy vitamin c sapi, 4 = Simulasi gummy vitamin c babi, 5 = Sampel gummy A, 6 = Sampel gummy B, 7 = Standar gelatin sapi, 8 = Standar gelatin tanpa hidrolisis enzim. M 1 2 3 KDa 200 116 97.4 66 45 31 21.5 14,4 6,5 4 5 6 7 8 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Analisa diawali dengan perhitungan regresi linear seri log bobot molekul pita pemisahan marker sebagai sumbu y dan nilai Rf sebagai sumbu x. Tabel 3. Nilai Log BM dan Nilai Rf Marker Protein No BM KDa Log BM y Pergerakan warna mm Jarak Pita mm Rf x 1 200 2,30 57 5 0,08 2 116 2,06 57 11,5 0,20 3 97,4 1,99 57 16 0,29 4 66 1,82 57 19,5 0,32 5 45 1,65 57 25,5 0,45 6 31 1,49 57 31 0,54 7 21,5 1,33 57 42 0,74 8 14,4 1,16 57 53,5 0,94 9 6,5 0,82 57 57 1 Kemudian dibuat kurva standar nilai Rf yang diperoleh terhadap nilai log BM yang dapat dilihat pada gambar UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Gambar 14. Kurva Regresi Linear Standar Marker Protein Hasil regresi linear diatas kemudian digunakan untuk menghitung bobot molekul pita pemisahan protein gelatin. Berdasarkan perhitungan diperoleh nilai a = 2,262, b = -1,316 dan nilai r = - 0,968. Maka diperoleh rumus y = -1,316x + 2,262, dengan rumus yang diperoleh dapat ditentukkan nilai Rf, BM dan Log BM dari pita protein sampel yang terbentuk. Tabel 4. Bobot Molekul Pita Gelatin Sapi, Gelatin Babi, Simulasi Gummy Gelatin Sapi,Simulasi Gummy gelatin Babi dan Sampel No SGS mm SGB mm SGVS mm SGVB mm SaA mm SaB mm SGSTHE mm BM kDa 1 21 21 21 21 21 21 - 59,86 2 27 - 27 - 27 27 - 43,51 3 - 30 - 30 - - - 37,10 4 32,4 - 32,4 - 32,4 32,4 - 32,66 5 - 38,4 - 38,4 - - - 23,73 6 - 42,6 - 46,2 - - - 18,68 7 48 - 48 - 48 48 - 16,14 2,3 2,06 1,99 1,82 1,65 1,49 1,33 1,16 0,82 0,5 1 1,5 2 2,5 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 Lo g B o b o t M o lek u l Nilai Rf Kurva Standar Marker Protein y = 2,262-1,316x R 2 = 0,968