Sampel Faktor – Faktor Yang Mempengaruhi Elektroforesis

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Gambar 9. Efek penambahan SDS dan merkaptoetanol pada protein Sumber: Davidson, 2001 Elektroforesis dapat digunakan untuk keperluan preparatif, selain bersifat analitik, bentuknya ada yang bersifat kolom, ada pula yang lempengan. Pada elektroforesis gel, molekul dipisahkan di dalam larutan buffer melalui suatu polimer matriks gel. Berbagai jenis gel telah dimanfaatkan oleh teknik ini. Diantaranya oleh gel pati, agarosa dan sekarang ini para ilmuwan cenderung mempergunakan jenis poliakrilamida. Akrilamida sebagai senyawa utama yang menyusun gel adalah merupakan senyawa karsinogenik Bintang, 2010. Polimer ini disusun oleh akrilamida dan N- N’-metil-en-bis- akrilamida yang berpolimerisasi dengan bantuan suatu katalisatorsistem radikal bebas, seperti ammonium persulfat APS dan katalisator N,N,N’,N’, tetrametilen diamin TEMED. Ammonium persulfat berfungsi sebagai inisiator yang mengaktifkan akrilamida agar bereaksi dengan molekul akrilamida yang lainnya membentuk rantai polimer yang panjang. Apabila APS dilarutkan ke dalam air maka akan membentuk radikal bebas: UIN Syarif Hidayatullah Jakarta S 2 O 3 2- → 2SO 4 2- Akrilamida yang telah diaktifkan ini selanjutnya bereaksi dengan molekul akrilamida berikutnya demikian seterusnya, sehingga akan dihasilkan rantai polimer yang panjang. Meskipun larutan rantai-rantai polimer ini kental viscous, akan tetapi belum terbentuk gel. Untuk terbentuknya gel diperlukan senyawa pembentuk ikatan silang cross- linking Agent. Hal ini dapat dicapai dengan melakukan polimerisasi dengan adanya N,N’-metilena-bis akrilamida. Bis ‐akrilamida berfungsi sebagai cross ‐linking agent yang membentuk kisi ‐kisi bersama polimer akrilamida. Kisi‐kisi tersebut berfungsi sebagai saringan molekul protein. Perbandingan antara akrilamida dengan bis akrilamida dapat diatur sesuai dengan berat molekul protein yang dipisahkan. Semakin rendah berat molekul protein yang dipisahkan, maka semakin tinggi konsentrasi akrilamida yang digunakan agar kisi ‐kisi yang terbentuk semakin rapat.