UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Hampir semua molekul menyerap sinar inframerah, kecuali molekul diatomik homonuklear seperti O
2
, N
2
dan H
2
. Spektra IR dari molekul poliatomik relatif kompleks karena adanya beberapa kemungkinan
transisi vibrasi, adanya overtone dan perubahan pita. Namun demikian pita absorpsi untuk beberapa gugus fungsi tertentu cukup tajam dan
karakteristik.Keseluruhan spektra IR dari satu molekul tertentu adalah karakteristik sehingga sangat berguna untuk mengidentifikasi senyawa.
Ada beberapa hal yang harus diperhatikan agar terjadi peresapan radiasi inframerah yaitu :
a Absorpsi terhadap radiasi inframerah dapat
menyebabkan eksitasi molekul ke tingkat energi vibrasi yang lebih tinggi.
b Vibrasi yang normal mempunyai frekuensi sama deng
an frekuensi radiasi elektromagnetik yang diserap.
c Proses absorpsi spectra IR hanya dapat terjadi
apabila terdapat perubahan baik nilai maupun arah dari momen dua kutub ikatan.
ATR adalah peralatan dimana sampel ditempatkan dipermukaan kontak dengan elemen ATR ZnSe kristal, 45
o
ujung. ATR digunakan untuk sampel yang menggunakan pelarut air
seperti gelatin. Kelebihan menggunakan ATR yaitu sensitifitasnya tinggi, tidak memerlukan preparasi sampel dan dapat meningkatkan
reprodusibilitas antar sampel.
B. KCKT Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Analisis asam amino merupakan metode penentuan komposisi asam amino atau kandungan protein dan peptida. Untuk
mengidentifikasi adanya asam amino, terlebih dahulu kita perlu menghidrolisis ikatan amin dengan sempurna untuk memperoleh
asam amino dalam keadaan bebas, kemudian kita memisahkan, mengidentifikasi dan menghitungnya. Hidrolisis dapat ilakukan pada
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
kondisi asam dan basa yang kuat, atau menggunakan enzim spesifik untuk memperoleh asam amino Bailey ,1990 .
Pada hidrolisis asam unsur yang diperlukan adalah HCl 6M, suhu 110
o
C dan waktu 24 jam. Reaksinya biasanya dilakukan ditabung kaca yang tertutup. Sementara itu pada hidrolisis basa, ikatan amida dapat
diputus dengan perlakuan terhadap peptida menggunakan NaOH 2M pada 100
o
C. Hidrolisis basa menghasilkan destruksi arginin, sistein, serin dan treonin. Selain itu adapula hidrolisis enzim. Peristiwa ini
terjadi didalam tubuh. Untuk menghancurkan makanan, perut memiliki enzim dengan kadar tertentu yang dapat dikatalisasi untuk memotong
ikatan peptida yang dikenal sebagai peptidase. Aminopeptidase bekerja cepat dan efisien dalam hidrolisis ikatan peptida sekaligus memotong
suatu residu asam amino mulai dari ujung N.Tahap selanjutnya, yaitu pemisahan. Pemisahan yang umum dilakukan adalah dengan cara
kromatografi. Diantara teknik kromatografi yang dapat dilakukan untuk pemisahan yaitu kromatografi penukar ion, kromatografi kertas, dan
kromatografi cair kinerja tinggi Bailey ,1990 . Kromatografi penukar ion umumnya sangat efisien dalam
memisahkan campuran asam amino. Metode ini menggunakan kolom penukar ion secara paralel dengan metode deteksi ninhidrin yang
hasilnya reprodusibel sehingga teknik ini sangat banyak digunakan dalam pemisahan dan analisis campuran asam amino. Kromatografi
kertas digunakan dalam pemisahan asam amino berdasarkan fakta bahwa gugus selulosa kertas memiliki afinitas kuat terhadap molekul air
,yang terbentuk oleh ikatan hidrogen dengan gugus OH pada rantai polisakarida. Jika asam amino tidak dapat dipisahkan dengan sempurna
dengan kromatografi kertas sederhana,maka kromatogram dua dimensi dapat digunakan.
Kromatografi merupakan salah satu teknik pemisahan yang dapat memisahkan dua atau tiga komponen dalam suatu campuran. HPLC
atau biasa disebut Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT dikembangkan pada akhir tahun 1960-an dan awal 1970-an. KCKT
