µg mL. Selanjutnya dibuat delapan seri kadar pengenceran yaitu 1585 µgmL; 1150 µgmL; 1000 µgmL; 562 µgmL; 300 µgmL; 178 µgmL; 100 µgmL; dan
10 µgmL. b. Kontrol positif Tablet tamoxifen
Larutan kontrol positif menggunakan tamoxifen dari 20 tablet Nolvadex yang tiap tabletnya mengandung 20 mg tamoxifen, ditimbang kemudian digerus
hingga homogen. Sebanyak 10 mg dilarutkan dalam DMSO 100 µL, didapatkan larutan stok kontrol dengan konsentrasi 100.000 µg mL. Selanjutnya dibuat tujuh
seri kadar pengenceran yaitu 1585 µgmL; 1150 µgmL; 1000 µgmL; 300 µgmL; 178 µgmL; 100 µgmL; dan 10 µgmL Setiawati, dkk., 2009.
8. Uji Sitotoksik ekstrak etanol daun Lavender pada sel T47D
a. Perlakuan sel T47D Sel T47D yang telah diinkubasi selama 24 jam dikeluarkan dari
inkubator dan dipindahkan menuju LAF Laminar Air Flow, seluruh kegiatan uji sitotoksik dilakukan didalam LAF yang sebelumnya telah diberi penyinaran UV
Ultra Violet. Selanjutnya, seluruh media didalam well-plate dibuang dan ditiriskan, lalu segera dipipet 100 µL sampel dari setiap seri kadar dan
dimasukkan kedalam lubang well-plate, dilakukan replikasi sebanyak tiga kali. Didalam satu well-plate yang berisi 96 lubang diisi oleh sampel, kontrol sel,
kontrol positif tablet tamoxifen. Selanjutnya, sel diinkubasi selama 24 jam didalam inkubator dan setelah inkubasi dilakukan pengamatan pada sel yang telah
diberi perlakuan sampel dibawah mikroskop inverter, tidak semua lubang diamati, hanya diambil beberapa lubang yaitu pada konsentrasi tertinggi, tengah dan
terendah, bentuk sel diamati dan diambil gambar dengan menggunakan kamera digital.
b. Metode MTT Seluruh reagen MTT dipersiapkan dengan cara mencampur 1 mL MTT
dengan 10 mL MK kedalam conical tube, digojog secara perlahan karena sangat mudah berbuih. Selanjutnya, media yang terdapat pada sel T47D perlakuan
dibuang dengan membalikan plate 180 diatas tempat pembuangan dengan jarak
10 cm kemudian tekan plate secara perlahan diatas tisu untuk meniriskan sisa cairan. Larutan PBS dimasukkan sebanyak 100 µL kedalam semua sumuran yang
telah berisi sel untuk mencuci sisa media yang masih bercampur dengan sel, kemudian buang PBS dengan cara membalik plate seperti perlakuan diatas.
Ditambahkan reagen MTT yang telah dipersiapkan sebelumnya sebanyak 100 µL ke setiap sumuran, termasuk kontrol media, dilakukan inkubasi selama empat jam
didalam inkubator CO
2
. Setelah itu, diamti kondisi sel dan formazan yang terbentuk dibawah mikroskop inverted, jika formasan telah terbentuk,
ditambahkan 100 µL SDS 10 dalam 0,1N HCl. Plate dibungkus menggunakan alumunium foil dan diinkubasi pada tempat gelap selama semalam pada suhu
kamar. American Type Culture Collection, 2011.
c. ELISA Reader ELISA reader dihidupkan dan ditunggu hingga proses regressing selesai.
Pembungkus plate dan tutup plate dibuka kemudian plate dimasukkan kedalam ELISA reader, absorbansi yang diperoleh dibaca pada λ= 595 nm, ditekan tombol
