Biosintesis, Sekresi dan Eskresi Kolesterol Dalam Tubuh

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 3. Pemilihan panjang gelombang Panjang gelombang yang digunakan untuk analisa kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbsi maksimal. Untuk memilih panjang gelombang maksimal, dilakukan dengan membuat kurva hubungan antara absorbsi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu. 4. Pembuatan kurva baku Seri larutan baku dibuat dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbsi dengan konsentrasi. Bila hubungan Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku berupa garis lurus. 5. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan Absorban yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2-0,8 atau 15-70 jika dibaca sebagai transmitan. Ini berdasarkan anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan adalah 0,005 atau 0,5 kesalahan fotometrik Rohman dan Ganjar, 2007 : 251-256. Spektrofotometri UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yang berupa larutan, gas atau uap. Sampel yang berupa larutan perlu memperhatikan beberapa persyaratan pelarut yang dipakai, antara lain : a. Pelarut yang dipakai tidak mengandung ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak berwarna. b. Tidak berinteraksi dengan molekul yang dianalisis. c. Kemurniannya harus tinggiderajat untuk analisis Mulja dan Suharman, 1995 : 28. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2.5.1. Instrumen Spektrofotometri Ultra Violet – Visible

Pada umumnya konfigurasi dasar setiap spektrofotometer UV-Vis berupa susunan peralatan optik terkonstruksi sebagai berikut : Gambar 2 . Instrumen Spektrofotometer UV-Vis Keterangan : SR = Sumber radiasi M = Monokromator SK = Sampel kompartemen D = Detektor A = Amplifier atau penguat VP = visual display atau meter Mulja dan Suharman, 1995 . Bagian-bagian instrumen spektrofotometer UV-Vis, yaitu : 1. Sumber radiasi Beberapa macam sumber radiasi yang dipakai pada spektrofotometer UV- Vis yaitu: a. Lampu deuterium Lampu deuterium dapat dipakai pada daerah panjang gelombang 190 sampai 380 nm. Berdasarkan rentang panjang gelombang tersebut sumber radiasinya memberikan spektrum energi yang lurus. Sedangkan pada panjang gelombang 486 nm sampai 651,1 nm memberikan dua garis spektra yang dipakai untuk mengecek ketepatan panjang gelombang pada spektro UV-Vis. b. Lampu tungtsen Merupakan campuran dari filamen tungtsen dan gas iodine halogen, digunakan sebagai sumber radiasi pada daerah pengukuran sinar tampak dengan rentangan panjang gelombang 380nm sampai 900 nm. Pada daerah tersebut sumber radiasi tungsten-iodin memberikan energi radiasi sebagai garis lengkung. SR D SK M A VD