12
Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron
molekul yang berada di sekitarnya. Radikal bebas tersebut dapat mengoksidasi asam nukleat, protein, lemak, bahkan DNA sel dan menginisiasi timbulnya
penyakit degeneratif Leong dan Shui, 2002.
E. Metode DPPH
Prinsip metode uji antioksidan DPPH didasarkan pada reaksi penangkapan atom hidrogen oleh DPPH reduksi DPPH dari senyawa antioksidan. Reagen
DPPH berperan sebagai radikal bebas yang diredam oleh senyawa antioksidan yang terkandung dalam sampel. Selanjutnya DPPH akan tereduksi menjadi
senyawa diphenylpicrylhidrazine DPPH-H Triana, 2013. Setelah bereaksi dengan senyawa peredam antioksidan, DPPH akan tereduksi dan warnanya akan
berubah menjadi kuning molyneux, 2004. Metode DPPH memberikan informasi reaktivitas senyawa yang diuji dengan suatu radikal stabil. DPPH memberikan
serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap Sunarni, 2005
.
Metode DPPH dipilih dengan pertimbangan bahwa metode ini lebih sederhana untuk menetapkan besarnya daya radikal bebas, tidak
memerlukan instrumen yang rumit dan bahan yang terlalu banyak. DPPH akan berwarna ungu apabila dilarutkan dalam pelarut yang dapat
melarutkannya etanol, metanol, campuran etanolmetanol dengan air, apabila bereaksi dengan peredam radikal bebas maka akan terjadi pemudaran warna ungu.
13
Perubahan warna ini diukur menggunakan spektrofotometer yang ditunjukknan dengan pembacaan nilai absorbansi Joyeux, 1995 cit. Valentina, 2013.
F. Penetapan Fenolik Total
Prinsip dari metode Folin Ciocalteu adalah menggunakan kemampuan gugus fenol mereduksi. Reaksi terhadap redoks tersebut akan terjadi pada suasana
basa. Reduksi fosfotungstanat fosfomolibdenum reagen Folin Ciocalteu oleh ion fenol merubah warna larutan yang diuji berwarna biru tua. Semakin tua warna
yang diperoleh semakin besar absorbansinya menunjukkan semakin besar jumlah kandungan fenol Yusoff dan Ade, 2011. Penetapan kandungan fenolik total
dilakukan dengan cara memberikan reagen Folin Ciocalteu dan reaksi yang terjadi adalah oksidasi dari ion fenolat senyawa uji oleh pereaksi fenol Folin-Ciocalteu,
dimana oksidasi dari senyawa fenol oleh reagen molibdotungstat menghasilkan produk dengan warna biru sekitar panjang gelombang 745-750 nm Prior, 2005.
Asam galat adalah sebuah asam organik yang dikenal sebagai 3,4,5- trihydroxybenzoicacid C
6
H
2
OH
3
COOH, asam galat ditemukan secara luas pada kerajaan tanaman. Asam galat dengan kadar yang tinggi ditemukan pada
gallnuts, anggur, sumac, daun teh, hops, dan kulit kayu oak Masoud et al., 2012.
Gambar 4. Asam Galat Masoud et al., 2012
14
G. Ekstraksi
