Pemurnian Kapang Endofit Prosedur Penelitian
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Kemudian 0,1 mL suspensi bakteri tersebut dimasukkan kedalam 10 mL media NB dan diinkubasi dengan shaker incubator 120 rpm, suhu 37
o
C sesuai dengan fase log masing-masing bakteri. Selanjutnya, masing-masing suspensi bakteri uji
pada fase log diambil 0,1 mL lalu diratakan diatas medium NA yang telah memadat Xu, 2010. Media NA ini selanjutnya digunakan untuk seleksi dan
pengujian antimikroba. Suspensi Candida albicans dibuat dengan cara, sebanyak satu ose biakan
Candida albicans yang berumur 3 hari dimasukkan kedalam 2 mL larutan NaCl fisiologis 0,9 steril, kemudian dihomogenkan dengan vortex. Kekeruhannya
diseragamkan dengan menggunakan standar Mc Farland III yang setara dengan 9x10
8
CFUmL. Selanjutnya, suspensi Candida albicans 10
9
diencerkan hingga pengenceran 10000 kali sehingga diperoleh suspensi 10
5
. Pengenceran dilakukan dengan cara suspensi 10
9
dipipet 1 mL ke dalam tabung reaksi berisi 9 mL NaCl 0,9 sehingga diperoleh suspensi mikroba 10
8
. Suspensi mikroba 10
8
dipipet 1 mL ke dalam tabung reaksi berisi 9 mL NaCl 0,9 sehingga diperoleh suspensi
mikroba 10
7
. Demikian seterusnya hingga diperoleh suspensi Candida albicans 10
5
Rachmayani, 2008. Suspensi Candida albicans 10
5
diambil 0,1 mL lalu diratakan diatas medium PDA yang telah memadat Xu, 2010. Media PDA ini
selanjutnya digunakan untuk seleksi dan pengujian antimikroba. Untuk kapang Aspergillus niger suspensi dibuat dengan cara biakan
kapang pada medium PDA miring yang telah diinkubasi selama 7 hari pada suhu 29
o
C dimasukkan 1 mL akuadest steril, spora dikerik dengan ose dan dimasukkan secara aseptis kedalam tabung reaksi yang berisi 9 mL akuadest streril, lalu
dihomogenkan dengan menggunakan vortex sehingga diperoleh suspensi spora pengenceran 10
-1
. Kemudian dlakukan pengenceran secara bertingkat sehingga diperoleh pengenceran sampai 10
-6
. Pengenceran dilakukan dengan cara suspensi 10
-1
dipipet 1 mL ke dalam tabung reaksi berisi 9 mL akuadest streril sehingga diperoleh suspensi mikroba 10
-2
. Suspensi mikroba 10
-2
dipipet 1 mL ke dalam tabung reaksi berisi 9 mL akuadest streril sehingga diperoleh suspensi mikroba
10
-3
. Demikian seterusnya hingga diperoleh suspensi mikroba 10
-6
Atika, 2007; Handayani, 2007. Media PDA ini selanjutnya digunakan untuk seleksi dan
pengujian antimikroba.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3.10 Seleksi Kapang Endofit yang Berpotensi Sebagai Antimikroba 3.3.10.1 Seleksi Kapang Endofit yang Berpotensi Sebagai Antibakteri dan
Antikhamir
Seleksi kapang endofit yang berpotensi sebagai antibakteri dan antikhamir dilakukan dengan metode difusi agar padat Diffusion Agar Plate Methode. Isolat
murni kapang endofit yang telah dimurnikan pada media MEA diambil dengan sedotan steril berdiameter 6 mm dan dipindahkan ke media NA yang telah
ditanami bakteri uji dan ke media PDA yang telah ditanami khamir uji. Satu cawan petri media NA yang berisi bakteri uji dan media PDA yang berisi khamir
uji dapat ditanami potongan isolat murni kapang endofit sebanyak 6 isolat. Kultur diinkubasi pada suhu 37
o
C selama 1-2 hari untuk kultur yang berisi bakteri uji dan inkubasi pada suhu 29
o
C selama 2-3 hari untuk kultur yang berisi khamir uji. Aktivitas antibakteri kapang endofit dilihat dari zona hambat yang terbentuk
Elfina et al., 2014. Isolat yang menunjukkan zona hambat dipilih sebagai isolat untuk pengujian selanjutnya yaitu fermentasi dan uji aktivitas antimikroba.