166
166 Lampiran 2. Prosedur uji hidrolisis pati, kasein, dan lemak
a. Uji hidrolisis kasein
∼ Media kultur agar yang mengandung kasein dimasukkan ke dalam cawan
petri. ∼
Inokulasi isolat yang akan diuji ke dalam media agar dengan cara menempatkan 1 mata ose biakan di bagian tengah cawan, kemudian
disebarkan seluas 0,5 cm. ∼
Selanjutnya diinkubasi pada suhu 29
o
C selama 24 sampai 48 jam. ∼
Hidrolisis kasein diukur dengan memberikan beberapa tetes larutan HCl 10 di atas permukaan media agar. Gunakan larutan HCl 10 secukupnya untuk
menutupi permukaan media agar. ∼
Jika terjadi proses hidrolisis kasein terlihat daerah bening di sekeliling koloni mikrob, sebaliknya bila tidak terjadi hidrolisis daerah sekitar koloni mikrob
tetap berwarna keruh. ∼
Ukur diameter wilayah yang dihidrolisis.
b. Uji hidrolisis pati
∼ Media kultur agar yang mengandung pati dimasukkan ke dalam cawan petri.
∼ Inokulasi isolat yang akan diuji ke dalam media agar dengan cara
menempatkan 1 mata ose biakan di bagian tengah cawan, kemudian disebarkan seluas 0,5 cm.
∼ Selanjutnya diinkubasi pada suhu 29
o
C selama 24 sampai 48 jam. ∼
Hidrolisis pati diukur dengan memberikan beberapa tetes larutan lugols iodine di atas permukaan media agar. Gunakan larutan lugols iodine secukupnya
untuk menutupi permukaan media agar. ∼
Jika terjadi proses hidrolisis pati terlihat daerah bening di sekeliling koloni mikrob, sebaliknya bila tidak terjadi hidrolisis daerah sekitar koloni
mikrob berwarna biru kehitaman. ∼
Ukur diameter wilayah yang dihidrolisis.
c. Uji hidrolisis lemak
∼ Media yang digunakan adalah lempengan spirit blue agar yang mengandung
3 reagens bacto lipase Difco atau reagen dapat diganti dengan emulsi 100 mL minyak zaitun dalam 400 mL akuades panas ditambah 1 mL Tween 80.
Tambahkan 30 mL emulsi ini ke dalam 1000 mL spirit blue agar sewaktu agar masih hangat 55
o
C. ∼
Inokulasi isolat yang akan diuji ke dalam media agar dengan cara menempatkan 1 mata ose biakan di bagian tengah cawan, kemudian
disebarkan seluas 0,5 cm. ∼
Selanjutnya diinkubasi pada suhu 29
o
C selama 24 sampai 48 jam.
167
167 ∼
Hidrolisis lemak terlihat sebagai warna biru di sekeliling pertumbuhan koloni mikrob, bila mikrob tidak menghasilkan lipase, maka wilayah di sekeliling
koloni sama dengan warna asal media biru pucat. ∼
Ukur diameter wilayah yang hidrolisis.
168
168 Lampiran 3. Prosedur uji degradasi substrat oleh mikrob
a. Memperoleh ekstrak enzim mikrob
Kategori