Gambar 4. Bagan rendemen
C. Optimasi Fase Gerak
Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu metode pemisahan senyawa pada suatu fase diam berdasarkan polaritas senyawa terhadap fase gerak
pembawa. KLT ini bertujuan untuk membantu skrining fitokimia dalam mengetahui komponen bioaktif apa saja yang terdapat dalam ekstrak etanolik
daun pegagan. Pada penelitian, pemisahan senyawa bioaktif dilakukan menggunakan
fase diam yaitu pelat aluminium TLC Silica gel 60 F
254
karena partikel silika pada pelat KLT dapat dikontrol keseragamannya sehingga pemisahan yang akan
terbentuk semakin optimal dan efisien. Pemisahan yang optimal pada KLT ditunjukkan dengan nilai Rf 0,2-0,8, untuk mendapat pemisahan yang baik maka
perlu dilakukan optimasi fase gerak. Optimasi fase gerak dilakukan dengan Rendemen Ekstrak
Etanolik Kental = 1,65 bb
Rendemen Fraksi Heksan =
15,59 bb Rendemen Fraksi
Kloroform : Metanol 95:5 vv
= 5,06 bb Rendemen Isolat
1 = 1,39 bb
Rendemen Isolat 2 = 0,99 bb
Rendemen Fraksi Kloroform:Metanol
9:1 vv = 0,41 bb
mencoba menggunakan 5 macam fase gerak, yaitu n-heksana : etil asetat 2:3 vv ; kloroform : metanol 7:3 vv ; kloroform : metanol 9:1 vv ; kloroform :
metanol 95:5 vv ; etil asetat:asam formiat:asam asetat glasial:air 100:11:11:20 vv. Pada Tabel 1, dapat dilihat hasil KLT yang menunjukkan bahwa pada fase
gerak etil asetat:asam formiat:asam asetat glasial:air 100:11:11:20 vv dapat memisahkan senyawa dengan sempurna menjadi 11 spot pemisahan. Akan tetapi,
fase gerak yang dipilih untuk penelitian selanjutnya adalah kloroform : metanol 95:5 vv. Pemilihan fase gerak ini karena fase gerak dapat memisahkan senyawa
aktif dengan optimal setelah fase gerak etil asetat:asam formiat:asam asetat glasial:air 100:11:11:20 vv yaitu didapatkan 6 spot pemisahan dengan bercak
yang lebih jelas. Pada fase gerak etil asetat:asam formiat:asam asetat glasial:air 100:11:11:20 vv tidak dipilih dengan pertimbangan pada saat uji aktivitas
selanjutnya akan sangat sulit menghilangkan pelarut karena fase gerak tersebut mengandung komponen pelarut yang susah menguap.
D. Uji Kualitatif Aktivitas Penangkapan Radikal Bebas Ekstrak Etanolik
Kategori