42
1. Penelitian Pendahuluan
a. Persiapan kultur bakteri uji
Pada tahap persiapan kultur bakteri uji dilakukan perhitungan total mikroba menggunakan metode hitungan cawan. Persiapan kultur
ini perlu dilakukan untuk mengetahui jumlah total mikroba sehingga dapat dihitung pengenceran yang diperlukan agar saat kultur digunakan
pada uji difusi sumur total mikroba pada cawan adalah 1x10
5
hingga 1x10
6
dan jumlah ini stabil di setiap cawan. Kultur murni yang berupa padatan diambil satu ose, kemudian
dilarutkan secara aseptis dalam media pertumbuhan NB 10 ml. Media NB yang telah berisi mikroba kemudian diinkubasi pada suhu ruang
37°C selama 24 jam. Setelah itu, dari NB 10 ml diambil 1 ml dan dimasukkan kedalam NB 9 ml, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C
selama 24 jam. Bila pada NB 9 ml cairannya berwarna keruh maka diambil 1 ml dari NB 9 ml dan diencerkan pada pengencer larutan
fisiologis 0.85 sampai pengenceran ke-8. Pada pengenceran ke-5 sampai dengan ke-8, diambil 1 ml dan dimasukkan kedalam cawan petri
steril. Kemudian diberi media pertumbuhan agar dengan metode tuang pour plate. Cawan kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 48
jam. Bila pada NB 9 ml cairannya berwarna bening maka diambil 1 ml
dari NB 9 ml dan diencerkan pada larutan pengencer larutan fisiologis 0.85 sampai pengenceran ke-5. Pada pengenceran ke-0 sampai
dengan ke-5, diambil 1 ml dan dimasukkan kedalam cawan petri steril. Kemudian diberi media pertumbuhan agar dengan metode tuang pour
plate . Cawan kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 48 jam.
Diagram alir persiapan kultur menggunakan metode hitungan cawan dapat dilihat pada Gambar 6.
Setelah dilakukan tahapan persiapan kultur dan telah didapat jumlah total mikroba, maka selanjutnya dihitung pengenceran yang
diperlukan saat mengerjakan uji difusi sumur.
43 Kultur Bakteri
Diambil satu ose Dimasukkan ke dalam 10 ml NB steril
Diinkubasi 24 jam pada suhu 37 ºC Diambil 1 ml
Dimasukkan ke dalam 9 ml NB steril Diinkubasi 24 jam pada suhu 37 ºC
Diamati kekeruhannya Keruh Agak bening
Dipipetl 1 ml Dipipet 1 ml Dimasukkan ke dalam
Dimasukkan ke dalam 9 ml pengencer steril 9 ml pengencer steril
Dilakukan pengenceran dari 10
1
-10
8
Dilakukan pengenceran dari 10 -10
5
Dipipet masing-masing 1ml Dipipet masing-masing 1 ml dari pengenceran 10
5
-10
8
dari pengenceran 10 -10
5
Masing-masing dimasukkan Masing-masing dimasukkan
ke dalam cawan petri steril ke dalam cawan petri steril Kedalam cawan petri dituang agar
Didiamkan hingga agar membeku Diinkubasi 48 jam pada 37 ºC
Diamati dan dihitung total mikroba
Ditentukan jumlah µl NB yang akan dimasukkan ke dalam 25 ml NA cair A
Gambar 6. Diagram alir metode hitungan cawan
44
b. Proses ekstraksi
Kategori