44
b. Proses ekstraksi
Ekstraksi tunggal dilakukan dengan mengekstrak secara langsung bubuk kulit kayu mesoyi. Tujuan dari ekstraksi tunggal adalah
mendapatkan ekstrak kulit kayu mesoyi yang dekat dengan aplikasi sehari-hari, dengan menggunakan pelarut yang aman dan mudah didapat
air dan etanol teknis. Selain itu, penyulingan minyak atsiri juga merupakan ekstraksi tunggal. Minyak atsiri diperoleh dengan teknik
destilasi uap, sedangkan ekstrak etanol dan air diperoleh dengan teknik ekstraksi refluks.
Pada ekstraksi tunggal bubuk kulit kayu mesoyi dilakukan ekstraksi langsung dengan etanol teknis dan juga aquades sebagai
pelarut. Perbandingan antara pelarut dengan bahan adalah 3:1 vw. Suhu refluks harus dibawah titik didih pelarut yang digunakan.
Karenanya ekstraksi dengan pelarut etanol teknis berlangsung pada suhu 60°C, sedangkan ekstraksi dengan aquades berlangsung pada suhu
100°C. Proses ekstraksi bahan secara refluks dicoba selama 5 jam secara
langsung dan 5 jam dengan pengulangan ekstraksi. Ekstraksi bahan selama 5 jam dengan pengulangan dilakukan dengan mengekstraksi
bahan selama 3 jam yang kemudian diekstraksi kembali selama 2 jam. Ekstrak hasil refluks selama 5 jam secara langsung ternyata memiliki
karakteristik yang lebih tidak baik dibandingkan dengan ekstrak hasil proses refluks selama 3 jam yang kemudian direfluks kembali selama 2
jam. Karakteristik yang tidak baik tersebut antara lain tidak adanya bau khas mesoyi dan rendemen yang lebih sedikit. Karenanya untuk
selanjutnya, baik pada ekstraksi tunggal ataupun ekstraksi bertingkat, ekstraksi refluks dilakukan selama 3 jam dan cairan disaring dengan
kertas saring Whatman No.1 kemudian diekstraksi kembali selama 2 jam dengan menambahkan pelarut dengan jumlah yang sama.
Cairan ekstrak yang didapat kemudian disaring dengan kertas saring Whatman No.1 menggunakan penyaring vakum. Proses ekstraksi
45 tunggal ini menghasilkan ekstrak air dan ekstrak etanol. Diagram alir
proses ekstraksi tunggal menggunakan etanol dan air dapat dilihat pada Gambar 7.
Dipekatkan dengan rotavapor pada suhu 40
o
C Dipekatkan dengan rotavapor
pada suhu
50
o
C Dihembuskan gas N
2
Gambar 7. Skema ekstraksi tunggal dengan pelarut etanol dan air Kulit kayu mesoyi didestilasi uap untuk mendapatkan minyak
atsiri. Dari minyak atsiri diperoleh komponen volatil kulit kayu mesoyi. Ampas kulit kayu mesoyi hasil penyulingan uap minyak atsiri tentu
masih mengandung komponen-komponen yang bersifat non-volatil, karena itulah diekstraksi lanjut secara bertingkat menggunakan pelarut
organik dengan rasio antara pelarut dan bahan adalah 3:1 vw. Tujuan Direfluks dengan etanol 60
o
C, 3 jam
Direfluks dengan air 100
o
C, 3 jam
Ampas Filtrat
Bubuk Kulit Kayu Mesoyi
Ampas Filtrat
Ulangan 60°C, 2
jam
Ekstrak etanol
Ekstrak air
Ulangan 60°C, 3
jam
46 ekstraksi bertingkat adalah fraksinasi dan mengisolasi komponen aktif.
Setelah dikeringkan dengan oven vakum selama 24 jam pada suhu kamar 35-40°C, ampas kulit kayu mesoyi kemudian diekstraksi
dengan pelarut heksan. Setelah heksan yang merupakan pelarut non polar kemudian
dilanjutkan proses ekstraksi secara bertingkat dengan pelarut yang lebih tinggi kepolarannya, yaitu etil asetat semi polar dan metanol polar.
Suhu yang digunakan pada proses ekstraksi bertingkat adalah 60°C. Pada ekstraksi bertingkat dilakukan proses pengulangan refluks
selama 3 jam kemudian diekstraksi kembali dengan pelarut yang sama selama 2 jam. Cairan ekstrak yang didapat disaring dengan kertas saring
Whatman No.1 menggunakan penyaring vakum. Setiap penggantian pelarut ampas dikeringkan dengan oven vakum selama 24 jam pada
suhu kamar 35-40°C. Diagram alir ekstraksi bertingkat dapat dilihat pada Gambar 8. Pada proses ekstraksi bertingkat ini diperoleh ekstrak
heksan, ekstrak etil asetat, dan ekstrak metanol. Jenis-jenis ekstrak kulit kayu mesoyi yang didapat, kecuali
minyak atsiri, kemudian dipekatkan menggunakan rotavapor. Ekstrak air dirotavapor pada suhu 50
o
C, sedang ekstrak etanol, ekstrak heksan, ekstrak etil asetat, dan ekstrak metanol dirotavapor pada suhu 40°C.
Suhu ini dipilih sehingga diharapkan senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak tidak akan rusak.
Ekstrak kemudian dihembus dengan gas N
2
sebelum disimpan. Penghembusan ekstrak dengan gas N
2
dilakukan terhadap seluruh ekstrak etanol, ekstrak heksan, ekstrak etil asetat, dan ekstrak metanol.
Botol ekstrak yang telah seluruhnya diganti kandungan udaranya dari O
2
menjadi N
2
akan menjadi dingin. Selain itu, ciri-ciri lainnya adalah berat ekstrak yang terus berkurang, yang berarti pelarut telah
dihilangkan oleh hembusan N
2
. Penghembusan gas N
2
dihentikan bila botol ekstrak tidak menjadi lebih lebih dingin lagi dan berat ekstrak
sudah stabil. Berat ekstrak yang stabil adalah bila berat sudah tidak berubah, atau paling tidak perubahannya tidak lebih dari 0,1 gr.
47
Ulangan 60 ºC, 2
jam Ulangan
60 ºC, 2 jam
Ulangan 60 ºC, 2
jam
Khusus untuk ekstrak air kulit kayu mesoyi dilakukan analisis kadar air ekstrak, karena air tidak dapat dihilangkan secara sempurna
oleh rotavapor. Pengukuran kadar air ekstrak air kulit kayu mesoyi dilakukan dengan metode azeotropik.
Direfluks dengan heksan 60
o
C, 3 jam `
Direfluks dengan etil asetat 60
o
C, 3 jam Dipekatkan 40
o
C Dihembus
gas N
2
Direfluks dengan metanol Dipekatkan 40
o
C 60
o
C, 3 jam Dihembus gas N
2
Dipekatkan 40°C
Dihembus gas N
2
Gambar 8. Diagram alir proses ekstraksi bertingkat dari ampas kulit kayu mesoyi c. Uji Difusi Sumur
Pengujian aktivitas antimikroba awal ekstrak-ekstrak kulit kayu mesoyi dilakukan dengan uji difusi sumur. Uji difusi sumur merupakan
Ampas Filtrat
Ampas Filtrat
Ampas Filtrat
Ekstrak metanol
Ampas hasil destilasi uap
Ekstrak heksan
Ekstrak etil asetat
48 uji kualitatif. Pada uji difusi sumur diukur diameter penghambatan.
Hasilnya kemudian digunakan untuk memilih ekstrak yang akan diuji lebih lanjut. Hasil uji difusi sumur diolah secara statistik. Uji lebih lanjut
yang dilakukan adalah penentuan nilai MIC dan uji fitokimia. Sesuai dengan hasil perhitungan total mikroba pada tahap
persiapan kultur bakteri uji, maka untuk mendapatkan total mikroba yang seragam didalam cawan uji difusi agar sebanyak 1x10
5
, maka kultur harus diencerkan sebanyak 10
-3
. Cara untuk mengencerkan sebanyak 10
-3
kali adalah dengan memasukkan 25 μl bakteri uji kedalam 25 ml agar.
2. Penelitian Lanjutan
Kategori