12 pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnnya
dilakukan pada suhu kamar Depkes RI., 2000.
2.4 Kromatografi
International Union Of Pure and Applied Chemistry IUPAC 1993 mendefinisikan kromatografi adalah metode pemisahan secara fisika yang mana
komponen-komponen yang akan dipisahkan terbagi diantara dua fase, yang satu fase diam sementara yang lain adalah fase gerak yang bergerak kearah tertentu
Gandjar dan Rohman, 2012. Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari
fase diam, yang berupa zat padat atau cair.Jika fase diam berupa zat padat disebut kromatografi serapan, jika berupa zat cair disebut kromatografi partisi. Karena
fase gerak berupa zat cair atau gas maka terdapat 4 macam sistem kromatografi, yaitu:
1. Fase gerak zat cair - fase diam padat kromatografi serapan:
- Kromatografi lapis tipis
- Kromatografi kolom
2. Fase gerak gas - fase diam padat
- Kromatografi gas - padat
3. Fase gerak zat cair - fase diam zat cair kromatografi partisi
- Kromatografi kertas
4. Fase gerak gas - fase diam cair
- Kromatografi gas - cair
13 -
Kromatografi kolom kapiler Pemisahan dengan kromatografi tergantung pada kenyataan bahwa
senyawa-senyawa yang dipisahkan terdistribusi diantara fase gerak dan fase diam dalam perbandingan yang sangat berbeda-beda dari satu senyawa terhadap
senyawa yang lain Sastrohamidjojo, 1991. 2.4.1
Kromatografi lapis tipis
Kromatografi lapis tipis KLT adalah metode pemisahan fisikokimia.Lapisan yang memisahkan, yang terdiri atas bahan berbutir-butir fase
diam, ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisahkan, berupa larutan, ditotolkan berupa bercak
atau pita. Setelah plat atau lapisan diletakkan dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok fase gerak, pemisahan terjadi selama
perambatan kapiler.Senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan Stahl,1985.
Pendeteksian bercak hasil pemisahan dapat dilakukan dengan beberapa cara, untuk senyawa tak berwarna cara yang paling sederhana adalah dilakukan
pengamatan dengan sinar ultraviolet. Beberapa senyawa organik bersinar atau berfluorosensi jika disinari dengan sinar ultraviolet gelombang pendek 254 nm
atau gelombang panjang 366 nm, jika dengan cara itu senyawa tidak dapat dideteksi maka harus dicoba disemprot dengan pereaksi yang membuat bercak
tersebut tampak yaitu pertama tanpa pemanasan, kemudian bila perlu dengan pemanasan Gritter dkk., 1991; Stahl, 1985.
a. Fase diam lapisan penyerap
14 Kromatografi lapis tipis, fase diam berupa lapisan tipis yang terdiri atas
bahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga datar yang biasanya terbuat dari kaca, plat polimer atau logam. Lapisan melekat pada permukaan
dengan bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat atau amilum. Penyerap yang umum dipakai untuk kromatografi lapis tipis adalah silika gel, alumina,
kieselgur dan selulosa Gritter dkk., 1991. Dua sifat yang penting dari fase diam adalah ukuran partikel dan
homogenitasnya, karena adesi terhadap penyokong sangat tergantung pada kedua sifat tersebut.Ukuran partikel yang biasa digunakan adalah 1-25 mikron.
Partikelyang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu cara untuk memperbaiki hasil pemisahan adalah
dengan menggunakan fase diam yang butirannya lebih halus. Butiran yang halus memberikan aliran pelarut yang lebih lambat dan resolusi yang lebih baik
Sastrohamidjojo, 1985.
b. Fase gerak pelarut pengembang
Fase gerak ialah medium angkut yang terdiri atas satu atau beberapa pelarut, jika diperlukan sistem pelarut multi komponen, harus berupa suatu
campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen Stahl, 1985.
Pemisahan senyawa organik selalu menggunakan pelarut campur yang bertujuan untuk memperoleh pemisahan senyawa yang baik. Kombinasi pelarut
adalah berdasarkan atas polaritas masing-masing pelarut, sehingga dengan demikian akan diperoleh sistem pengembang yang cocok. Pelarut pengembang
yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis antara lain: n-heksana,
Kategori