Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Alopurinol

Nilai indeks polaritas yang semakin besar akan menyebabkan fase gerak bersifat lebih polar. Alopurinol yang memiliki nilai polaritas sebesar 11,92 MarvinSketch merupakan senyawa yang bersifat polar. Berdasarkan prinsip like dissolve like, maka komposisi fase gerak metanol :amonium hidroksida 0,1 dalam akuabides10:90 dengan nilai indeks polaritas sebesar 9,69 dapat mengelusi alopurinol pada sistem KCKT ini. Sistem elusi yang digunakan adalah sistem isokratik dimana tidak ada perubahan komposisi fase gerak selama proses elusi. Tujuan digunakannya sistem isokratik karena peneliti ingin melihat respon pemisahan yang dapat dihasilkan oleh optimasi campuran fase gerak.Pencampuran kedua komposisi fase gerak dilakukan di dalam instrumen KCKT. Komponen fase gerak harus disaring terlebih dahulu dengan menggunakan kertas saring Whatmanukuran pori 0,45 m dengan bantuan pompa vakum untuk menghilangkan adanya partikel-partikel kecil yang dapat menyumbat kolom sehingga dapat mempengaruhi analisis pada sistem KCKT. Kertas saring Whatman yang digunakan untuk menyaring fase gerak terdapat dua macam yaitu kertas Whatman organik yang digunakan untuk menyaring larutan organik metanol dan kertas Whatman anorganik untuk menyaring larutan anorganik akuabides.Selanjutnya fase gerak di degassing dengan menggunakan ultrasonikator selama 15 menit yang bertujuan untuk menghilangan gelembung udara yang terdapat dalam fase gerak. Adanya gelembung udara yang terdapat dalam fase gerak dapat mengakibatkan tekanan pada pompa menjadi tidak stabil sehingga mempengaruhi proses pembacaan sinyal dalam instrumen KCKT.

c. Optimasi Komposisi Fase Gerak dan Flow Rate

Optimasi yang dilakukan dengan menggunakan metode KCKT ini adalah mengubah komposisi fase gerak dan flow rate untuk mendapatkan pemisahan yang optimal. Komposisi fase gerak yang dilakukan adalah 10:90; 20:80 dan 30:70 campuran metanol dan amonium hidroksida 0,1 dalam akuabides dengan flow rate 0,5; 0,8 dan 1 mLmenit. Berikut ini merupakan kromatogram optimasi komposisi fase gerak dan flow rate kurva baku alopurinol. a Fase gerak I metanol : amonium hidroksida 0,1 dalam akuabides 10:90