18 Dehidrasi dengan dimasukkan ke dalam alkohol 80, alkohol 95, alkohol
absolut xylol 2 kali
19 Mounting dengan menggunakan E. Z mount.
3.9.2. Prosedur Analisa Preparat Imunohistokimia
Pembacaan preparat imunohistokimia dilakukan dengan modifikasi metode Rato dkk, menggunakan mikroskop cahaya dengan kamera otomatis Matsuoka
Nissei, Japan pada pembesaran 400x. Area yang terwarnai antibodi anti-insulin
area sel beta berwarna cokelat. Analisa data menggunakan software imageJ yang dikembangkan oleh National Institutes of Health NIH Amerika Serikat. Analisa
menggunakan perbandingan antara regions of interest ROI pada masing-masing gambar. Caranya adalah sebagai berikut:
- definisi manual dari ROI-1 – yaitu pulau Langerhans. - pengukuran area ROI-1
- definisi area sel beta pankreas – ROI-2 - pengukuran ROI-2
Dari hasil tersebut didapatlah persentase sel beta pankreas yang ada dalam sebuah pulau Langerhans Rato et. al., 2013. Hasilnya didapatkan dengan
membandingkan antara satu area sel beta pankreas dengan rata-rata keseluruhan area pulau Langerhans. Persentase pada satu sampel didapatkan dari hasil rata-rata
5 pulau Langerhans pada setiap sampelnya.
3.9.3 Prosedur Pemeriksaan KGD
Pemeriksaan KGD dilakukan dengan menggunakan kit Diasys dan spektrofotometer. Sebanyak 10 µl serum direaksikan dengan 1000 µl reagen,
dicampur dengan bantuan vortex selama 1 menit. Pembacaan aktivitas KGD
Universitas Sumatera Utara
dilakukan pada panjang gelombang 500 nm, pada suhu 20 – 25 °C. Kadar Gula Darah dalam satuan mgdL dapat diukur dengan alat spektrofotometer dengan
menggunakan metode GOD-PAP. Glukosa ditentukan setelah oksidasi enzimatis dengan adanya glukosa oksidase, hidrogen peroksida yang terbentuk akan
bereaksi dengan adanya peroksidase dengan phenol serta 4-aminophenazone menjadi warna quinoneimine yang berwarna merah violet Kurniasari, 2004.
Hasil pembacaan dari alat spektrofotometer dicatat, kemudian KGD dihitung dengan menggunakan rumus di bawah ini :
Perhitungan: Glucose mgdL = [A sampleA StdCal] x Conc.StdCal [mgdl]
3.10 Analisis Data
