fermentum 2B4 + EPEC SIMPULAN DAN SARAN

50 Lampiran 7. Data Jumlah Limfosit Organ Limpa Tikus Percobaan Hari ke-7 T1 Hari ke-14 T2 Hari ke-21 T3 Tikus Σ sel x 10 6 Rata2 sel x 10 6 Tikus Σ sel x 10 6 Rata2 sel x 10 6 Tikus Σ sel x 10 6 Rata2 sel x 10 6 A2 1.01 A6 48.57 A8 101.44 A4 2.08 A7 48.57 A11 106.52 A9 1.19 1.43±0.57 A10 40.37 45.84±4.73 A15 116.16 108.04±7.48 B2 12.87 B8 38.21 B6 207.30 B3 12.01 B10 45.42 B14 173.03 B4 12.09 12.32±0.47 B11 32.00 38.54±6.72 B15 108.16 162.83±50.35 C2 13.10 C7 46.92 C9 179.24 C4 12.91 C10 44.16 C12 157.92 C11 12.86 12.96±0.13 C15 53.90 48.33±5.02 C13 150.48 162.55±14.93 D2 12.20 D5 95.47 D1 95.60 D7 11.79 D11 97.46 D9 87.92 D13 13.15 12.38±0.70 D14 91.04 94.66±3.29 D10 83.76 89.03±6.01 E7 30.67 E3 164.96 E2 86.56 E8 36.33 E4 118.64 E10 113.28 E9 16.28 27.76±10.34 E14 168.68 150.76±27.88 E15 139.66 113.17±26.55 F3 2.51 F2 26.04 F5 26.84 F6 4.60 F4 27.76 F7 50.16 F10 2.23 3.11±1.30 F15 17.92 23.91±5.26 F13 37.96 38.32±11.66 Keterangan: A = Kontrol Negatif B = L. plantarum 2C12 C = L. fermentum 2B4 D = L. plantarum 2C12 + EPEC E = L. fermentum 2B4 + EPEC F = Kontrol Positif 51 Lampiran 8. Hasil Analisis Sidik Ragam Sel Limfosit Hari ke-7 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 3 2 L. plantarum 2C12 3 3 L. fermentum 2B4 3 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 6 Kontrol + 3 Ulangan 1 6 2 6 3 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Jumlah_limfosit Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 3.808E15 a 8 4.759E14 26.785 .000 Kelompok_perlakuan 1.319E15 5 2.638E14 14.844 .000 Ulangan 4.148E13 2 2.074E13 1.167 .350 Error 1.777E14 10 1.777E13 Total 3.985E15 18 a. R Squared = .955 Adjusted R Squared = .920 Jumlah_limfosit Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 3 Kontrol - 3 1.43E6 Kontrol + 3 3.11E6 L. plantarum 2C12 3 1.23E7 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 1.24E7 L. fermentum 2B4 3 1.30E7 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 2.78E7 Sig. .635 .864 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = 17769073333333.330. 52 Lampiran 9. Hasil Analisis Sidik Ragam Sel Limfosit Hari ke-14 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 3 2 L. plantarum 2C12 3 3 L. fermentum 2B4 3 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 6 Kontrol + 3 Ulangan 1 6 2 6 3 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Jumlah_limfosit Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 1.147E17 a 8 1.433E16 84.588 .000 Kelompok_perlakuan 3.373E16 5 6.746E15 39.813 .000 Ulangan 1.222E14 2 6.112E13 .361 .706 Error 1.695E15 10 1.695E14 Total 1.164E17 18 a. R Squared = .985 Adjusted R Squared = .974 Jumlah_limfosit Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 3 Kontrol + 3 2.39E7 L. plantarum 2C12 3 3.85E7 Kontrol - 3 4.58E7 L. fermentum 2B4 3 4.83E7 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 9.47E7 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 1.51E8 Sig. .058 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = 169451173333333.300. 53 Lampiran 10. Hasil Analisis Sidik Ragam Sel Limfosit Hari ke-21 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 3 2 L. plantarum 2B12 3 3 L. fermentum 2B4 3 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 6 Kontrol + 3 Ulangan 1 6 2 6 3 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Jumlah_limfosit Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 2.608E17 a 8 3.260E16 46.450 .000 Kelompok_perlakuan 3.333E16 5 6.665E15 9.496 .001 Ulangan 3.631E14 2 1.815E14 .259 .777 Error 7.019E15 10 7.019E14 Total 2.678E17 18 a. R Squared = .974 Adjusted R Squared = .953 Jumlah_limfosit Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 3 Kontrol + 3 3.83E7 L. plantarum 2C12 + EPEC 3 8.91E7 8.91E7 Kontrol - 3 1.08E8 1.08E8 L. fermentum 2B4 + EPEC 3 1.13E8 1.13E8 L. fermentum 2B4 3 1.63E8 L. plantarum 2B12 3 1.63E8 Sig. .053 .338 .051 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = 778116964550264.000. y = 0.0002x + 0.0144 R² = 0.985 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 200 400 600 800 1000 A b so r b a n si TEP ρmol50 µl 55 Lampiran 12. Data Kadar MDA Hati Tikus Percobaan µmolgram hati Kelompok Tikus Berat hati gram Absorbansi Kadar MDA ρmol50 µl Kadar MDA µmolgram hati Rata-rata MDA U1 U2 U1 U2 U1 U2 µmolgram hati Kontrol negatif Hari ke-7 T1A2 1.2578 0.084 0.086 348 358 0.0692 0.0712 0.0838±0.02 T1A3 0.9755 0.1 0.081 428 333 0.1097 0.0853 Hari ke-14 T2A6 1.9289 0.076 0.069 308 273 0.0399 0.0354 0.0473±0.01 T2A7 1.5828 0.079 0.094 323 398 0.051 0.0629 Hari ke-21 T3A8 1.6663 0.13 0.147 578 663 0.0867 0.0995 0.087±0.00 T3A11 1.5236 0.121 0.105 533 453 0.0875 0.0743 BAL L. plantarum 2C12 Hari ke-7 T1B1 1.5455 0.097 0.104 413 448 0.0668 0.0725 0.0692±0.00 T1B2 1.3105 0.082 0.091 338 383 0.0645 0.0731 Hari ke-14 T2B8 1.5925 0.093 0.104 393 448 0.0617 0.0703 0.0688±0.00 T2B9 1.8079 0.122 0.114 538 498 0.0744 0.0689 Hari ke-21 5 5 56 T3B6 1.7013 0.154 0.153 698 693 0.1026 0.1018 0.0991±0.00 T3B13 1.5371 0.133 0.132 593 588 0.0964 0.0956 BAL L. fermentum 2B4 Hari ke-7 T1C1 1.6199 0.091 0.077 383 313 0.0591 0.0483 0.0519±0.00 T1C2 1.6724 0.084 0.079 348 323 0.052 0.0483 Hari ke-14 T2C7 1.3996 0.088 0.085 368 353 0.0657 0.0631 0.0614±0.00 T2C8 1.4035 0.072 0.088 288 368 0.0513 0.0656 Hari ke-21 T3C3 1.6882 0.123 0.156 543 708 0.0804 0.1048 0.0971±0.01 T3C9 1.3429 0.127 0.12 563 528 0.1048 0.0983 BAL L. plantarum 2C12 + EPEC Hari ke-7 T1D7 1.0273 0.056 0.062 208 238 0.0506 0.0579 0.0572±0.00 T1D13 1.2301 0.065 0.082 253 338 0.0514 0.0687 Hari ke-14 T2D5 1.6212 0.241 0.158 1133 718 0.1747 0.1107 0.1181±0.03 T2D11 1.8535 0.148 0.158 668 718 0.0901 0.0968 Hari ke-21 T3D1 1.1233 0.165 0.139 753 623 0.1676 0.1387 0.1307±0.03 T3D9 1.2368 0.119 0.124 523 548 0.1057 0.1108 BAL L. fermentum 2B4 + EPEC Hari ke-7 5 6 57 T1E6 1.7825 0.082 0.076 338 308 0.0474 0.0432 0.0442±0.00 T1E7 1.4119 0.059 0.067 223 263 0.0395 0.0466 Hari ke-14 T2E3 2.1208 0.198 0.164 918 748 0.1082 0.0882 0.1058±0.01 T2E4 1.7199 0.151 0.19 683 878 0.0993 0.1276 Hari ke-21 T3E2 1.2785 0.12 0.106 528 458 0.1032 0.0896 0.0886±0.01 T3E10 1.4098 0.112 0.099 488 423 0.0865 0.075 Kontrol positif Hari ke-7 T1F3 1.4911 0.065 0.087 253 363 0.0424 0.0609 0.0489±0.00 T1F6 1.4115 0.066 0.067 258 263 0.0457 0.0466 Hari ke-14 T2F1 1.834 0.162 0.149 738 673 0.1006 0.0917 0.0981±0.00 T2F2 1.6256 0.162 0.127 738 563 0.1135 0.0866 Hari ke-21 T3F5 1.0698 0.114 0.132 498 588 0.1164 0.1374 0.1035±0.03 T3F7 1.3202 0.096 0.102 408 438 0.0773 0.0829 5 7 58 Lampiran 13. Hasil Uji Lanjut Duncan Kadar MDA Hati Tikus Percobaan Hari ke-7 Menggunakan SPSS α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model .044 a 7 .006 84.038 .000 Kelompok_perlakuan .002 5 .000 5.814 .038 Ulangan 3.675E-5 1 3.675E-5 .488 .516 Error .000 5 7.536E-5 Total .045 12 a. R Squared = .992 Adjusted R Squared = .980 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 3 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .044175 Kontrol + 2 .048900 L. fermentum 2B4 2 .051925 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .057150 .057150 L. plantarum 2C12 2 .069225 .069225 Kontrol - 2 .083850 Sig. .113 .111 .058 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .000. 59 Lampiran 14. Hasil Uji Lanjut Duncan Kadar MDA Hati Tikus Percobaan Hari ke-14 Menggunakan SPSS α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model .091 a 7 .013 42.117 .000 Kelompok_perlakuan .008 5 .002 5.073 .050 Ulangan 9.901E-6 1 9.901E-6 .032 .865 Error .002 5 .000 Total .093 12 a. R Squared = .983 Adjusted R Squared = .960 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 Kontrol - 2 .047300 L. fermentum 2B4 2 .061425 L. plantarum 2C12 2 .068825 Kontrol + 2 .098100 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .105825 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .118075 Sig. .156 .187 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .000. 60 Lampiran 15. Hasil Uji Lanjut Duncan Kadar MDA Hati Tikus Percobaan Hari ke-21 Menggunakan SPSS α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model .126 a 7 .018 73.658 .000 Kelompok_perlakuan .003 5 .001 4.061 .050 Ulangan .001 1 .001 4.645 .084 Error .001 5 .000 Total .127 12 a. R Squared = .990 Adjusted R Squared = .977 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 Kontrol - 2 .087000 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .088600 L. fermentum 2B4 2 .097075 L. plantarum 2C12 2 .099100 Kontrol + 2 .103500 .103500 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .130750 Sig. .350 .050 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .000. 48 Lampiran 16. Data Kadar MDA Ginjal Tikus Percobaan µmolgram ginjal Kelompok Tikus Berat Ginjal gram Absorbansi Kadar MDA ρmol50 µl Kadar MDA µmolgram ginjal Rata-rata MDA U1 U2 U1 U2 U1 U2 µmolgram hati Kontrol negatif Hari ke-7 T1A2 0.5868 0.149 0.148 673 668 0.2867 0.2846 0.6994±0.59 T1A3 0.5734 0.554 0.496 2698 2408 1.1763 1.0499 Hari ke-14 T2A6 0.8841 0.21 0.221 978 1033 0.2766 0.2921 0.274±0.01 T2A7 0.7875 0.159 0.202 723 938 0.2295 0.2978 Hari ke-21 T3A8 0.5841 0.183 0.201 843 933 0.3608 0.3993 0.3538±0.04 T3A11 0.7293 0.193 0.218 893 1018 0.3061 0.349 BAL L. plantarum 2C12 Hari ke-7 T1B1 0.6483 0.185 0.175 853 803 0.3289 0.3097 0.3007±0.03 T1B2 0.6362 0.159 0.157 723 713 0.2841 0.2802 Hari ke-14 T2B8 0.7455 0.239 0.239 1123 1123 0.3766 0.3766 0.3353±0.06 T2B9 0.789 0.206 0.194 958 898 0.3035 0.2845 6 1 49 Hari ke-21 T3B6 0.902 0.212 0.197 988 913 0.2738 0.253 0.2641±0.00 T3B13 0.9189 0.214 0.204 998 948 0.2715 0.2579 BAL L. fermentum 2B4 Hari ke-7 T1C1 0.6428 0.164 0.161 748 733 0.2909 0.2851 0.3017±0.02 T1C2 0.5969 0.186 0.144 858 648 0.3594 0.2714 Hari ke-14 T2C7 0.7222 0.208 0.203 968 943 0.3351 0.3264 0.3338±0.00 T2C8 0.7766 0.223 0.224 1043 1050 0.3358 0.338 Hari ke-21 T3C3 0.8468 0.172 0.168 788 768 0.2326 0.2267 0.2233±0.01 T3C9 0.9516 0.197 0.162 913 738 0.2399 0.1939 BAL L. plantarum 2C12 + EPEC Hari ke-7 T1D7 0.5671 0.158 0.168 718 768 0.3165 0.3386 0.3426±0.02 T1D13 0.514 0.177 0.146 813 658 0.3954 0.32 Hari ke-14 T2D5 0.6994 0.197 0.174 913 798 0.3263 0.2852 0.2802±0.04 T2D11 0.9015 0.181 0.215 833 1003 0.231 0.2781 Hari ke-21 T3D1 0.5139 0.196 0.182 908 838 0.4417 0.4077 0.3675±0.08 T3D9 0.6448 0.184 0.165 848 753 0.3288 0.292 6 2 50 BAL L. fermentum 2B4 + EPEC Hari ke-7 T1E6 0.54 0.188 0.151 868 683 0.4019 0.3162 0.3621±0.00 T1E7 0.4984 0.152 0.168 688 768 0.3451 0.3852 Hari ke-14 T2E3 0.9299 0.189 0.173 873 793 0.2347 0.2132 0.2897±0.09 T2E4 0.6491 0.184 0.214 848 998 0.3266 0.3844 Hari ke-21 T3E2 0.4792 0.219 0.215 1023 1003 0.3348 0.3348 0.3514±0.02 T3E10 0.6004 0.159 0.157 723 713 0.368 0.368 Kontrol positif Hari ke-7 T1F3 0.453 0.164 0.18 748 828 0.4128 0.457 0.3514±0.02 T1F6 0.4266 0.179 0.163 824 743 0.4827 0.4354 Hari ke-14 T2F1 0.6256 0.197 0.173 913 793 0.3648 0.3169 0.3959±0.08 T2F2 0.5243 0.194 0.213 898 993 0.4282 0.4735 Hari ke-21 T3F5 0.4323 0.143 0.169 643 773 0.3928 0.3928 0.4137±0.03 T3F7 0.5971 0.165 0.144 753 648 0.4346 0.4346 7 9 6 3 64 Lampiran 17. Hasil Analisis Sidik Ragam Kadar MDA Ginjal Tikus Percobaan Hari ke-7 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol- 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 2.302 a 7 .329 5.876 .034 Kelompok_perlakuan .231 5 .046 .826 .580 Ulangan .064 1 .064 1.148 .333 Error .280 5 .056 Total 2.582 12 a. R Squared = .892 Adjusted R Squared = .740 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 L. plantarum 2C12 2 .300750 L. fermentum 2B4 2 .301700 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .342650 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .362150 Kontrol + 2 .447000 Kontrol- 2 .699400 Sig. .163 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .056. 65 Lampiran 18. Hasil Uji Lanjut Duncan Kadar MDA Ginjal Tikus Percobaan Hari ke-14 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 2.478 a 7 .275 97.673 .000 Kelompok_perlakuan .043 5 .009 3.059 .042 Ulangan .006 1 .002 .678 .579 Error .042 5 .003 Total 2.520 12 a. R Squared = .983 Adjusted R Squared = .973 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 Kontrol - 2 .274000 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .280150 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .289725 L. fermentum 2B4 2 .333825 .333825 L. plantarum 2C12 2 .335300 .335300 Kontrol + 2 .395850 Sig. .159 .137 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .003. 66 Lampiran 19. Hasil Uji Lanjut Duncan Kadar MDA Ginjal Tikus Percobaan Hari ke-21 Menggunakan SPSS 16.0 α=0.05 Univariate Analysis of Variance Between-Subjects Factors Value Label N Kelompok_perlakuan 1 Kontrol - 2 2 L. plantarum 2C12 2 3 L. fermentum 2B4 2 4 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 5 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 6 Kontrol + 2 Ulangan 1 6 2 6 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Kadar_MDA Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model 1.350 a 7 .193 113.058 .000 Kelompok_perlakuan .050 5 .010 5.903 .037 Ulangan .001 1 .001 .521 .503 Error .009 5 .002 Total 1.358 12 a. R Squared = .994 Adjusted R Squared = .985 Kadar_MDA Duncan Kelompok_perlakuan N Subset 1 2 3 L. fermentum 2B4 2 .223300 L. plantarum 2C12 2 .264050 .264050 L. fermentum 2B4 + EPEC 2 .351400 .351400 Kontrol - 2 .353850 .353850 L. plantarum 2C12 + EPEC 2 .367550 .367550 Kontrol + 2 .413700 Sig. .369 .061 .205 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean SquareError = .002. 67 1 POTENSI BAKTERI ASAM LAKTAT PROBIOTIK INDIGENUS SEBAGAI ANTIDIARE DAN IMUNOMODULATOR PADA TIKUS PERCOBAAN SKRIPSI DWI FEBIYANTI F24062963 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2011 2 POTENCY OF INDIGENOUS PROBIOTIC LACTIC ACID BACTERIA AS ANTIDIARRHEA AND IMMUNOMODULATOR AT RATS Dwi Febiyanti and Made Astawan Department of Food and Science Technology Faculty of Agricultural Technology, IPB. PO Box 220. IPB Darmaga, Bogor 16002 ABSTRACT The present study was to observe the ability of indigenous probiotic lactic acid bacteria LAB Lactobacillus plantarum 2C12 and Lactobacillus fermentum 2B4 as antidiarrhea at rats that infected by Entero-pathogenic Escherichia coli EPEC, and also to detect the impact toward immunomodulator characteristic. malonaldehyde level at liver and kidney and proliferation of lymphocyte cell from spleen. A total of 90 male Sprague Dawley rats were used for this study and devided into 6 groups i.e.: 1 Control Negative without infection of EPEC and LAB, 2 L. plantarum 2C12, 3 L. fermentum 2B4, 4 L. plantarum 2C12 + EPEC, 5 L. fermentum 2B4 + EPEC, and 6 Control Positive with infection of EPEC. The treatment of LAB as many as 1 ml per day 10 8 cfuml was undertaken from 1 th -21 th day, while infection of EPEC with 10 6 cfuml population as many as 1 ml per day was undertaken from 8 th -14 th day. Observation of rat body weight growth resulting the body weight groups of L. plantarum 2C12 + EPEC, L. fermentum 2B4 + EPEC, and control positive, was decreased since 12 th -21 th day. Analysis of variance with Duncan Test has shown that the treatment given to 6 groups of rats give effect significantly p0.05 toward PER value, water content ww of feces, amount of lymphocyte cell, and malonaldehyde level at liver and kidney rats. Keywords: L. plantarum 2C12, L. fermentum 2B4, EPEC, antidiarrhea, immunomodulator 3 Dwi Febiyanti. F24062963. Potensi Bakteri Asam Laktat Probiotik Indigenus sebagai Antidiare dan Imunomodulator pada Tikus Percobaan . Di bawah bimbingan Made Astawan. 2011 RINGKASAN Diare akut merupakan penyebab utama kematian bayi di negara-negara berkembang, termasuk Indonesia. Beberapa bakteri patogen penyebab diare yaitu Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp., dan Helicobacter pylori Lestari, 2009. WHO menyatakan ada sekitar 4 milyar kasus diare infeksi setiap tahun dengan tingkat mortalitas 3-4 juta per tahun Zein et. al., 2004. Arief 2008 telah berhasil mengisolasi 10 BAL indigenus dari daging sapi yang berasal dari beberapa pasar tradisional di daerah Bogor. Ke-10 BAL tersebut memiliki karakteristik sebagai bakteri probiotik dan menghasilkan senyawa antimikroba yang menghambat pertumbuhan bakteri enteropatogenik seperti Enterotoxigenic Escherichia coli ETEC, Staphylococcus aureus, dan Salmonella typhimurium. Secara in vitro, ke-10 BAL tersebut diuji aktivitas antimikrobanya terhadap Enteropathogenic Escherichia coli EPEC. Berdasarkan hasil identifikasi diketahui bahwa Lactobacillus plantarum 2C12 dan Lactobacillus fermentum 2B4 memiliki penghambatan terbaik terhadap EPEC Arief, 2008. Berdasarkan beberapa fakta tersebut, dalam penelitian ini akan diteliti lebih lanjut mengenai potensi BAL, terutama L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4, sebagai antidiare dan imunomodulator. Penelitian ini dilakunan secara in vivo menggunakan tikus percobaan. Tikus jantan Albino Norway Rats Rattus novergicus galur Sprague Dawley umur 5-6 minggu sebanyak 90 ekor dibagi dalam 6 kelompok perlakuan, yaitu kelompok kontrol negatif, L. plantarum 2C12, L. fermentum 2B4, L. plantarum 2C12 + EPEC, L. fermentum 2B4 + EPEC, dan kontrol positif. Selama percobaan, semua kelompok tikus diberi pakan ransum standar. Pemberian BAL dilakukan selama tiga minggu penuh hari ke-1 sampai ke-21, secara oral menggunakan sonde. BAL yang diberikan berupa L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4 sebanyak 1 ml dengan populasi 10 8 cfuml. Infeksi EPEC dilakukan dengan populasi 10 6 cfuml sebanyak 1 mlhari selama 7 hari hari ke-8 sampai ke-14, secara oral menggunakan sonde. Pembedahan tikus untuk analisis peubah yang diamati dilakukan pada hari ke-7, 14, dan 21. Organ hati dan ginjal diambil untuk analisis kadar malonaldehida MDA, serta organ limpa diambil untuk uji proliferasi sel limfosit. Selama pemeliharaan, tikus yang diberi EPEC mengalami penurunan bobot badan sejak hari ke-12 hingga ke-21. Penurunan bobot badan ini diperkuat dengan nilai PER tikus percobaan. Analisis sidik ragam menunjukkan bahwa perlakuan yang diberikan berpengaruh nyata p0.05 terhadap nilai PER tikus percobaan. Tikus kelompok L. fermentum 2B4 memiliki nilai PER yang paling tinggi, sedangkan tikus kelompok kontrol positif memiliki nilai PER yang paling rendah. Uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa nilai PER tikus kelompok L. fermentum 2B4 + EPEC tidak berbeda nyata dengan nilai PER tikus kelompok L. plantarum 2C12 + EPEC dan dengan kontrol positif, namun berbeda nyata dengan kelompok tikus lainnya. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa jika dilihat dari profil kejadian diare pada tikus percobaan, L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4 memiliki potensi untuk mencegah diare atau bersifat sebagai antidiare. Jika dilihat dari profil jumlah sel limfosit serta kadar MDA hati dan ginjal tikus percobaan, L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4 berpotensi dalam meningkatkan respon imun atau bersifat sebagai imunomodulator. Namun, L. fermentum 2B4 cenderung lebih berpotensi sebagai imunomodulator dibandingkan L. plantarum 2C12. 1

I. PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG

Diare akut merupakan penyebab utama kematian bayi di negara-negara berkembang termasuk Indonesia. Di Indonesia diare masih menjadi masalah kesehatan dan penyakit ini dapat terjadi pada semua golongan usia. Hasil Survei Kesehatan Rumah Tangga SKRT tahun 2004 melaporkan bahwa angka kematian akibat diare mencapai 23 orang per 100 ribu penduduk dan pada balita sebesar 75 balita per 100 ribu balita Anonim, 2010. Selama tahun 2006, sebanyak 41 kabupaten di 16 provinsi melaporkan Kejadian Luar Biasa KLB diare di wilayahnya Qauliyah, 2010. Salah satu penyebab diare yaitu infeksi bakteri patogen di saluran pencernaan. Beberapa bakteri patogen penyebab diare antara lain Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp., dan Helicobacter pylori Lestari, 2009. Diare atau mencret didefinisikan sebagai buang air besar dengan kondisi feses yang tidak berbentuk atau cair, dengan frekuensi lebih dari 3 kali selama 24 jam. Penyebab diare terbesar adalah infeksi dan intoksikasi poisoning. WHO World Health Organization menyatakan ada sekitar 4 milyar kasus diare infeksi setiap tahun dengan tingkat mortalitas 3-4 juta per tahun Zein et. al., 2004. Menurut data UNICEF United Nations Children’s Fund dan WHO pada 2009, diare merupakan penyebab kematian nomor 2 pada balita di dunia, nomor 3 pada bayi, dan nomor 5 bagi segala umur. UNICEF memberitakan bahwa 1.5 juta anak meninggal dunia setiap tahunnya karena diare Anonim, 2010. Salah satu cara mencegah diare adalah dengan menjaga keseimbangan mikroflora saluran pencernaan, yaitu dengan mengonsumsi produk probiotik dan prebiotik secara teratur. Probiotik merupakan produk yang mengandung sel-sel mikroorganisme hidup dalam jumlah cukup yang bermanfaat bagi kesehatan manusia FAOWHO, 2002. Sebagian besar strain bakteri asam laktat BAL merupakan bakteri probiotik yang sangat bermanfaat bagi kesehatan tubuh. Penelitian mengenai probiotik indigenus Indonesia dan kemampuannya dalam mencegah diare akibat bakteri patogen telah banyak dilakukan. Lestari 2009 menyebutkan bahwa BAL yang diisolasi dari gatot L. plantarum Mut7 dan L. sake Mut13, growol L. casei subsp. rhamnosus TGR2, tape singkong L. plantarum, tempoyak L. fermentum, asinan rebung L. acidophilus, dan tempe L. casei subsp. rhamnosus TTE1 mampu bertahan pada suasana asam di saluran pencernaan, dan tahan dalam konsentrasi garam empedu. Menurut Fuller 1989, probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang dapat dimanfaatkan untuk keseimbangan populasi mikroba dalam usus. Penelitian-penelitian para ahli telah membuktikan bahwa secara in vitro bakteri probiotik galur Lactobacillus dan Bifidodobacteria dapat menghambat penempelan dan invasi bakteri enteropatogen penyebab diare Bourlioux et. al., 2003; Ishibashi dan Yamazaki, 2001. Beberapa peneliti juga melaporkan bahwa mengonsumsi BAL golongan Lactobacillus mampu meningkatkan sistem imun seluler dan humoral di antaranya peningkatan populasi dan proliferasi sel limfosit, produksi sitokin interferon-γ IFN-γ, interleukin-12 IL-12, IL-10, sel imun Th, serta imunoglobulin Ig A, IgE, IgG, dan IgM Gackowska et. al., 2006; dan Attaouri et. al., 2002. Arief 2008 telah berhasil mengisolasi 10 BAL indigenus dari daging sapi yang berasal dari beberapa pasar tradisional di daerah Bogor. Ke-10 BAL tersebut memiliki karakteristik sebagai bakteri probiotik dan menghasilkan senyawa antimikroba yang menghambat 2 pertumbuhan bakteri enteropatogenik seperti Enterotoxigenic Escherichia coli ETEC, Staphylococcus aureus, dan Salmonella typhimurium. Secara in vitro, ke-10 BAL tersebut diuji aktivitas antimikrobanya terhadap Enteropathogenic Escherichia coli EPEC. Berdasarkan hasil identifikasi diketahui bahwa Lactobacillus plantarum 2C12 dan Lactobacillus fermentum 2B4 memiliki penghambatan terbaik terhadap EPEC Arief, 2008. Namun demikian, sifat fungsional lainnya belum diteliti, terutama sifat fungsional sebagai pencegah diare karena infeksi EPEC. Selain itu, telah diketahui bahwa beberapa strain probiotik memiliki aktivitas bakterisidal terhadap bakteri patogen, termasuk EPEC, dengan cara meningkatkan status imun inang yang mengonsumsinya sebagai imunomodulator. Berdasarkan beberapa fakta yang telah disebutkan di atas, dalam penelitian ini akan diteliti lebih lanjut mengenai potensi BAL, terutama L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4 yang merupakan BAL probiotik indigenus Indonesia, sebagai antidiare dan imunomodulator. Penelitian ini dilakunan secara in vivo menggunakan tikus percobaan.

B. TUJUAN

Tujuan dari penelitian ini adalah: 1. Menguji kemampuan BAL probiotik indigenus L. plantarum 2C12 dan L. fermentum 2B4 sebagai antidiare pada tikus percobaan yang diinduksi dengan bakteri penyebab diare, EPEC. 2. Mengevaluasi dampak pemberian BAL tersebut terhadap beberapa sifat imunomodulator, yaitu profil proliferasi sel limfosit yang diambil dari organ limpa tikus percobaan dan profil malonaldehida pada organ hati dan ginjal tikus percobaan. 3. Memperoleh BAL probiotik indigenus yang lebih berpotensi sebagai antidiare dan imunomodulator. 3

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Bakteri Asam Laktat Probiotik

Bakteri asam laktat BAL pertama kali ditemukan oleh Louis Pasteur seorang profesor kimia di University of Lille, di tahun 1878. Pada tahun 1889, Tissier, peneliti Perancis pada Laboratorium Louis Pasteur, menemukan bakteri yang mendominasi saluran usus bayi yang mengonsumsi ASI, yaitu Bifidobacterium. BAL dan Bifidobacteria termasuk ke dalam kelompok bakteri baik bagi manusia, dan umumnya memenuhi status GRAS Generally Recognized as Safe, yaitu aman bagi manusia Surono, 2004. BAL merupakan bakteri gram positif, katalase negatif, tidak membentuk spora, tidak mempunyai sitokrom, aerotoleran, anaerobik hingga mikroaerofilik, membutuhkan nutrisi yang kompleks seperti asam-asam amino, vitamin B kompleks B 1 , B 6 , B 12 , dan biotin, purin, dan pirimidin. Secara umum, niasin dan asam pantotenat bersifat esensial bagi pertumbuhan BAL. BAL memerlukan nutrisi yang sangat kompleks, oleh karena itu, umumnya memerlukan habitat yang kaya akan nutrisi, seperti susu, daging, minuman, dan sayuran. Namun, beberapa BAL juga terdapat pada mulut, saluran usus, dan vagina mamalia. Variasi karakteristik BAL normal terjadi, namun yang mutlak adalah sifatnya sebagai bakteri gram positif Surono, 2004. Beberapa peneliti menganggap Bifidobacterium termasuk ke dalam kelompok BAL, meskipun secara philogenetik berbeda. Beberapa kesamaan di antara keduanya adalah produksi asam laktat, ekologi tempat hidup dan fungsinya, serta pemanfaatannya sebagai kultur fermentasi susu. Seiring dengan kemajuan biologi molekuler, pada tahun 1980 genus BAL berkembang menjadi 15 genus, namun hanya lima genus yang berperan dalam proses fermentasi susu, yaitu Lactobacillus sp., Lactococcus sp., Leuconostoc sp., Pediococcus sp., dan Streptococcus sp. Di alam, BAL dapat ditemukan dalam dua sistem ekologi, yaitu saluran pencernaan manusiahewan mamalia dan produk makanan nabati maupun hewani, baik berupa kontaminasi alami maupun ditambahkan untuk tujuan fermentasi. Beberapa jenis BAL yang menghuni saluran pencernaan, atau disebut enteric lactic acid bacteria, di antaranya adalah Bifidobacterium bifidum, B. longum, B. infatis pada bayi, B. adolescentris yang menempati usus besar manusia, Lactobacillus acidophilus, L. gasseri, L. crispatus, L. johnsonii, L. salivarius, L. ruminis, L. vitulinus, L. reuteri, dan L. fermentum yang hidup dalam usus halus Surono, 2004. Menurut Fuller 1989, probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang dapat dimanfaatkan untuk keseimbangan populasi mikroba dalam usus. Efek kesehatan yang menguntungkan dari probiotik antara lain adalah: 1 memperbaiki keluhan malabsorbsi laktosa atau lactose intolerance, 2 meningkatkan ketahanan alami terhadap infeksi di usus dan bahaya kanker, 3 meningkatkan sistem kekebalan Kim, 1990. Klein et. al. 1998 melaporkan bahwa taksonomi dan fisiologi spesies Lactobacillus probiotik termasuk ke dalam kelompok Lactobacillus acidophilus, L. casei, dan L. reuteriL. fermentum. Menurut Surono 2004, strain probiotik, yang di dalamnya termasuk BAL, membantu sistem imun dengan: 1 modulasi sistem imun, meningkatkan produksi antibodi dan mengaktifkan makrofag, limfosit dan sel-sel imun lainnya, 2 meningkatkan produksi musin dalam usus sehingga meningkatkan respon imun alami, 3 menghambat patogen dalam saluran air seni dan usus melalui persaingan dalam mendapatkan nutrisi dan membentuk biosurfaktan dan 4 molekul koagregasi yang mencegah pelekatan dan penyebaran patogen pada sel epithelial, 4 menghasilkan senyawa antibakteri, seperti bakteriosin, 5 menurunkan pH dengan dihasilkannya asam laktat yang menghambat pertumbuhan bakteri patogen, dan 6 menekan aktivitas enzim penghasil amin yang toksik dan karsinogenik dari bakteri usus lainnya. Kriteria yang harus diperhatikan untuk menentukan strain mikroba probiotik yaitu: 1 mampu memfermentasikan susu dalam waktu yang relatif cepat, 2 mampu menggandakan diri, 3 tahan terhadap suasana asam sehingga mampu hidup dan bertahan dalam saluran pencernaan, 4 menghasilkan produk akhir yang dapat diterima konsumen, dan 5 mempunyai stabilitas yang tinggi selama proses fermentasi, penyimpanan, dan distribusi Hoier, 1992.

B. Bakteri Escherichia coli E. coli Penyebab Diare

Diare atau mencret didefinisikan sebagai buang air besar dengan kondisi feses yang tidak berbentuk atau cair dengan frekuensi lebih dari 3 kali selama 24 jam. Penyebab diare terbesar adalah infeksi dan intoksikasi poisoning. Bakteri patogen yang menyebabkan terjadinya diare antara lain Escherichia coli, Salmonella thypii, Salmonella parathypii, Vibrio cholera, dan Shigella sp. Bakteri Escherichia coli yang ditemukan oleh Theodor Escherich tahun 1885 merupakan bakteri yang berasal dari kotoran hewan atau manusia, baik sakit maupun sehat. Oleh karena itu, dikenal juga dengan istilah koli tinja. Secara garis besar, klasifikasi bakteri E .coli berasal dari Filum Proteobacteria, Kelas Gamma Proteobacteria, Ordo Enterobacteriales, Familia Enterobacteriaceae, Genus Escherichia, Spesies Escherichia coli. Secara morfologi E. coli merupakan bakteri berbentuk batang pendek, gemuk, berukuran 2.4 µ x 0.4 sampai 0.7 µ, Gram- negatif, tidak bersimpai, bergerak aktif dan tidak berspora Hakli, 2009. Menurut Nataro dan Kaper 1998 tipe patogenesis dari strain E. coli dapat dibedakan menjadi Enteropathogenic E. coli EPEC, Enterotoxigenic E. coli ETEC, Enteroinvasive E. coli, EIEC, Enterohaemorrhagic E. coli EHEC, Enteroagregative E. coli EAEC, dan Diffusely Adherent Escherichia coli DAEC. Interaksi beberapa E. coli patogenik dengan sel epithelial usus ditunjukkan pada Gambar 1. EPEC melekat pada permukaan mukosa usus dan menyebabkan terjadinya perubahan struktur sel. Pelekatan EPEC pada permukaan mukosa ditunjukkan pada Gambar 2. EPEC kemudian melakukan invasi menembus sel mukosa. Pada dosis 10 5 -10 10 , sel EPEC dapat menyebabkan diare Sussman, 1997. EPEC melekat pada sel mukosa yang kecil. Infeksi EPEC yang melibatkan gen EPEC adherence factor EAF, menyebabkan perubahan konsentrasi kalsium intraseluler dan arsitektur sitoskeleton di bawah membran mikrovilus. Seperti ETEC, EPEC juga menyebabkan diare tetapi dengan mekanisme molekuler kolonisasi yang berbeda. EPEC memiliki sedikit fimbria, tidak menghasilkan sitotoksin, tetapi EPEC menggunakan adhesion yang dikenal sebagai intimin untuk mengikat sel usus inang. Sel EPEC juga bersifat invasif jika memasuki sel inang dan menyebabkan radang Collier, 1998. Mekanisme induksi EPEC ditunjukkan pada Gambar 3.