25 perubahan 0.3872 µmol sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa dalam satu
menit pada total volume larutan 2 ml. Semakin besar nilai aktivitas yang diperoleh menunjukkan bahwa
enzim yang dianalisa memiliki aktivitas yang tinggi pula, karena nilai tersebut menunjukkan banyaknya jumlah substrat yang dikatalisis oleh enzim dalam
satu satuan waktu menit. Kecepatan reaksi akan berlangsung lebih cepat, sehingga nilai V
maks
pun cepat tercapai. Nilai aktivitas yang diperoleh tersebut dapat dikatakan rendah, namun
hal tersebut bukan merupakan permasalahan dalam pengujian hubungan pengaruh perubahan faktor terhadap aktivitas enzim akibat penambahan
kawao. Respon yang diberikan pada pengaruh perubahan faktor masih dapat diukur, walaupun menggunakan invertase dengan aktivitas yang rendah.
B. Penentuan Pengaruh Konsentrasi Inhibitor Kawao
Dalam penentuan pengaruh konsentrasi inhibitor, dilakukan penentuan rentang konsentrasi inhibitor yang mampu memberikan respon inhibisi atau
daya hambat terhadap aktivitas invertase. Hal tersebut ditunjukkan dengan menurunnya gula pereduksi glukosa dan fruktosa yang dibandingkan dengan
kondisi kontrol tanpa kawao. Analisis sidik ragam pada Lampiran 3 bagian A, menunjukkan bahwa konsentrasi kawao yang diujikan memberikan
pengaruh nyata terhadap konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan. Nilai konsentrasi gula pereduksi terendah adalah pada saat konsentrasi
kawao 5 vv yakni sebesar 103.727 µM, sedangkan konsentrasi gula pereduksi tertinggi adalah pada titik kontrol tidak ada penambahan kawao
yakni sebesar 671 µM. Kurva pengaruh konsentrasi kawao terhadap aktivitas enzim invertase dapat dilihat pada Gambar 15.
26
200 400
600 800
2,5 5
10 15
20 25
Konsentrasi inhibitor vv K
ons entras
i
g lukosa+f
ru kt
osa uM
Gambar 15. Kurva pengaruh konsentrasi kawao terhadap konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan
Berdasarkan hasil uji daya inhibisi, menunjukkan bahwa akibat penambahan kawao, gula pereduksi cenderung menurun, namun seiring
dengan meningkatnya konsentrasi kawao hingga konsentrasi 25 vv, terlihat adanya peningkatan jumlah gula pereduksi, namun tidak melebihi nilai
kontrol. Terlihat bahwa penambahan kawao mampu memberikan respon inhibisi aktivitas invertase dengan baik.
Gula pereduksi secara signifikan menurun dengan penambahan kawao 2.5 vv, selanjutnya penurunan masih terlihat secara landai pada
penambahan kawao 5 vv. Penambahan kawao lebih dari 5 vv hingga 20 vv meningkatkan gula pereduksi secara tidak signifikan, namun pada
penambahan kawao 25 vv terjadi peningkatan secara signifikan. Hasil sidik ragam dan uji lanjut Duncan dapat dilihat pada Lampiran 3 bagian A.
Peningkatan gula pereduksi terjadi seiring dengan peningkatan konsentrasi kawao yang ditambahkan, hal tersebut dapat diduga bahwa dalam
kawao juga terdapat gula pereduksi ataupun golongan sakarida lain yang ikut terhidrolisis, dan perbandingannya dengan zat aktif inhibitor lebih besar.
Pendugaan ini cukup beralasan karena hasil pengujian ekstrak kawao murni dengan pereaksi DNS tanpa adanya sukrosa dan invertase menunjukkan
bahwa semakin tinggi konsentrasi kawao, semakin tinggi pula gula pereduksi yang dihasilkan. Selain itu, didukung pula oleh hasil uji fitokimia kawao pada
Lampiran 7 yang menunjukkan nilai positif untuk pemeriksaan glikosida.
27 Pada penambahan inhibitor 5 vv diperoleh nilai gula pereduksi
terendah, sehingga untuk selanjutnya jumlah inhibitor yang terpilih adalah sebesar 5 vv untuk volume total sampel sebanyak 2 ml. Hasil pengujian
kawao menunjukkan bahwa aktivitas invertase mampu dihambat. Inhibisi terhadap aktivitas enzim invertase diduga disebabkan oleh golongan alkaloid
yang memberikan aksi penghambatan kepada substrat untuk memasuki daerah katalitik enzim, karena pada ekstrak kawao melalui pengujian fitokimia secara
kualitatif mengandung bahan aktif berupa alkaloid. Hasil pengujian fitokimia kawao dapat dilihat pada Lampiran 7.
Trojanowicz et al. 2004 menyatakan bahwa selain ion-ion logam, terdapat bahan lain yang menjadi inhibitor bagi invertase, bahan tersebut
antara lain adalah kelompok glikoprotein, polipeptida, dan alkaloid.
C. Hubungan Pengaruh Perubahan Faktor Terhadap Degradasi Sukrosa
