45
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Perubahan faktor konsentrasi inhibitor kawao, konsentrasi enzim, konsentrasi substrat, pH, suhu dan lama pemanasan berpengaruh nyata
terhadap gula pereduksi yang dihasilkan. Akibat penambahan kawao, pada masing-masing perlakuan perubahan faktor yang mempengaruhi aktivitas
enzim, diperoleh bahwa nilai konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan kontrol tanpa penambahan kawao. Hal tersebut
menunjukkan bahwa kawao terbukti sebagai inhibitor aktivitas invertase. Konsentrasi inhibitor kawao terpilih adalah pada konsentrasi 5
vv karena memberikan respon pembentukan gula pereduksi yang paling rendah. Inhibisi akibat penambahan kawao pada pengaruh perubahan
konsentrasi enzim tercapai mulai konsentrasi enzim 1.65 mgl. Pada pengaruh perubahan substrat, inhibisi mulai terjadi pada konsentrasi substrat sekitar 7.5
gl. Pada faktor perubahan nilai pH, akibat penambahan kawao, aktivitas invertase maksimum tercapai pada pH 4, bergeser dari kondisi normal pada
pH 5 dan suhu optimumnya bergeser pula dari 50
o
C menjadi 60
o
C pada faktor perubahan suhu. Inhibisi terjadi pada rentang pH 4-7 dan mulai suhu 0-60
o
C. Pada faktor lama pemanasan, inhibisi aktivitas invertase berlangsung pada 30
detik pertama dan memberikan respon inhibisi yang cukup baik. Kinetika inhibisi laju degradasi sukrosa oleh kawao yang dilakukan
pada pH 7, dengan tiga titik suhu 30°C, 40°C, 50°C menghasilkan nilai K
M
dan V
maks
yang berbeda. Akibat penambahan kawao, nilai parameter kinetika K
M
dan V
maks
inhibisi lebih rendah dibandingkan kondisi normal tanpa penambahan kawao, efek inhibisi dengan jelas diperlihatkan pada kurva
Michaelis-Menten di mana, nilai V
maks
inhibisi lebih rendah dibandingkan nilai V
maks
semula. Model kinetika inhibisi invertase oleh kawao pada ketiga suhu tersebut adalah sama yakni unkompetitif parsial, seperti ditunjukkan
pada kurva Lineweaver-Burk.
46
B. Saran
Penambahan kawao terbukti memberikan pengaruh pada larutan simulasi sukrosa, selain itu telah diketahui pula bagaimana pengaruh
penambahan kawao pada berbagai faktor perlakuan yang mempengaruhi aktivitas enzim. Selanjutnya perlu dilakukan penelitian bagaimana pengaruh
penambahan kawao pada larutan nira, sehingga dapat diketahui apakah penambahan kawao juga memberikan hasil yang baik untuk mengatasi
kerusakan akibat aktivitas invertase. Selain itu dapat pula dilakukan penentuan bahan aktif inhibitor dari akar kawao serta proses pemurniannya, sehingga
diperoleh bahan aktif inhibitor yang dapat langsung digunakan.
47
DAFTAR PUSTAKA
Alberto, F., C. Bignon, G. Sulzenbacher, B. Henrissat, M. Czjzek. 2004. The three-dimensional structure of invertase
-fructosidase from Thermotoga maritima reveals a bimodular arrangement and an
evolutionary relationship between retaining and inverting glycosidases. Architecture et Fonction des Macromolécules Biologiques, CNRS and
Université Aix-Marseille I II. Perancis.
Bailey, J. E., dan David F. Ollis. 1988. Dasar-Dasar Rekayasa Biokimia. Alih bahasa A. Aziz D., Liesbetini, Illah Sailah, Lien Herlina. Pusat Antar
Universitas. IPB Bogor. Birch, Peter Dr. 2005. Enzyme Kinetics. Universitas Paisley. http:www-
biol.paisley.ac.ukkineticscontents.html. Bracho, G. E. dan John R. Whitaker. 1990. Characteristics of the Inhibition of
Potato Solanum tuberosum Invertase by an Endogenous Proteinaceous Inhibitor in Potatoes-Journal of Plant Physiology hlm 381-385.
Causette, M., Alain, G., Henri, P., Pierre, M., dan Brigitte, L. 1998. Inactivation of Enzymes by Inert Gas Bubbling. Enzyme Engineering XIV. Vol. 864,
New York. Cavaille, D. dan Didier, C. 1996.
High pressure and temperature: How to diactivate enzymes in two different ways. Enzyme Engineering XIII. Vol.
799, New York. Chaplin, M.F., C. Bucke. 1990. Enzyme Technology. Cambridge University Press.
New York. Chaplin, Martin. 2003. Enzymes and Enzyme Technology: Enzyme Kinetics Km
and Vmax. http:www.lsbu.ac.ukbiologyenzymeindex.html. Darmono. 1995. Logam Dalam Sistem Biologi Makhluk Hidup. UI Press. Jakarta.
Eijsink, Vincent G.H., A. Bjork, S. Gaseidnes, R. Sirevag, B. Synstad, B. van den Burg, G. Vriend. 2004. Rational engineering of enzyme stability. Journal
of Biotechnology 113 2004 hlm 105-120. Eijsink, Vincent GH., S. Gaseidnes, T. V. Borchert, B. van den Burg. 2005.
Directed Evolution of Enzyme Stability. Journal of Biomolecular Engineering 22 2005 hlm 21-30.
Ewing, E. E., M. Devlin, Deborah A. Mcneill, M. H. McAdoo and Anne M. H.. 1977. Changes in Potato Tuber Invertase and Its Endogenous Inhibitor
After Slicing, Including a Study of Assay Methods. Journal of Plant Physiology hlm 925-929.
48 Filho, U. C., C. E. Hori and E. J. Ribeiro. 1999. Influence Of The Reaction
Products In The Inversion of Sucrose by Invertase. Journal. Braz. J. Chem. Eng. vol.16 n.2 São Paulo June 1999. http:www.scielo.br.
Flickinger, M. C. dan S. W. Drew. 1999. Kinetics and Stoichiometry Growth, Enzymes. Encyclopedia of Bioprocess Technology : Fermentation,
Biocatalysis and Bioseparation. John Wiley and Sons, Inc. Glazer, A. N. and Nikaido, H., 1995. Microbial Technology Fundamentals of
Applied Microbiology. W. H. Freeman and Company, New York. Greiner, S., S. Krausgrill dan T. Rausch. 1998. Cloning of Tobacco Apoplasmic
Invertase Inhibitor. Journal of Plant Physiol. February 1;1162:733-742. Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia II. Penerbit Yayasan Sarana Wana
Jaya. Jakarta. Hothorn, M., Igor D’ Angelo, Jose´ A. Marquez, S. Greiner, K. Scheffzek. 2003.
The Invertase Inhibitor Nt-CIF from Tobacco: A Highly Thermostable Four-helix Bundle with an Unusual N-terminal Extension. Journal
Molecular Biology JMB. Hlm 987–995.
Hsiao, C. C., R. H. Fu., Y. Sung. 2002. A Novel Bound of Plant Invertase in Rice Suspension Cells. Botanical Bulletin of Academia Sinica Vol 43: 115-122.
Lee, Young H., 2003. Biosensors. Engineering Biotechnology Gateway Project. Drexel University.
Lehninger.1988. Dasar-dasar Biokimia. Jilid 1. Terjemahan. Penerjemah : Maggy Thenawidjaja. Erlangga. Jakarta.
Monsan, P. dan D. Combess. 1984. Stabilization of Enzyme Activity. The Procedings of Biotechnology `84 Europe Online 1984. Published by online
Publication, Ltd., London. Pancoast, H. M dan W. R. Junk. 1980. Handbook of Sugar. Second Edition. AVI
Publishing Company, Inc. Westport, Connecticut. Pelczar, MJ dan Chan CS. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. Edisi 1. Terjemahan.
Penerjemah: S.R. Hadioetomo, Imas T, Angka L S. UI Press. Jakarta. Pirvutoiu, S., I. Surugiu, E. S. Dey, A. Ciucu, V. Magearu and B. Danielsson.
2001. Flow injection analysis of mercuryII based on enzyme inhibition and thermometric detection. Journal Analyst. The Royal Society of
Chemistry. Hlm 1612–1616.
Pressey, Russell and Roy Shaw. 1966. Effect of Temperature on Invertase, Invertase Inhibitor, and Sugars in Potato Tubers. Journal of Plant Physiol.
Hlm 1657-1661.
49 Rahman, M. H., A. H. Akand, T. Yeasmin, Md. S. Uddin dan M. Rahman. 2001.
Purification and Properties of Invertase from Mango Fruit. Pakistan Journal of Biological Sciences 4 10. Hlm 1271-1274.
Rahman, S.M.M. Mahbubur, Palash K.S., Fida M.H., Sarnad M.A.M, and Habibur M.R. 2004.
Purification and Characterization of Invertase Enzyme from Sugarcane. Pakistan Journal of Biological Sciences 73.
Hlm 340-345. Rodwell, V. W. 1981. Kinetic Properties of Enzymes di dalam D. W. Martin, P.
A. Mayes dan V. W. Rodwell. 1981. Harper’ s Review of Biochemistry. 18
th
ed. Lange Medical Publications. Los Altos, California. Simanjutak dan Silalahi. 2005. Biokimia. FMIPA USU, Medan.
Stauffer, C. E. 1989. Enzyme Assays for Food Scientist. An AVI Book. Van Nostrand Reinhold. New York.
Suryani, A dan D. Mangunwidjaya. 2002. Rekayasa Proses. Departemen Teknologi Industri Pertanian. Fakultas Teknologi Pertanian. Institut
Pertanian Bogor. Bogor. Trojanowicz, M., D. Compagnone, C. Gonçales, Z. Jonca, and G. Palleschi. 2004.
Limitations in the Analytical Use of Invertase Inhibition for the Screening of Trace Mercury Content in Environmental Samples. Journal. Analytical
Sciences, vol. 20. Hlm 899-904.
Wang, N. S. 2002. Enzyme Kinetics of Invertase Via Initial Rate Determination. Department of Chemical Engineering, University of Maryland, College
Park, Md 20742-2111, Ench 485. Webb, J. L. 1963. Enzyme and metabolic Inhibitors. Volume I. Academic Press.
New York.
50 Lampiran 1. Prosedur penelitian tambahan
A. Persiapan larutan buffer asetat 0.05 M, pH 4.5
Kategori