Karakteristik Kapang Endofit yang Mempunyai Aktivitas Antibakteri

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta hepatoprotektif, kardioprotektif, antidiare, antikanker, antikejang, antiinflamasi, dan aktivitas analgesik Chauchan et al., 2012. Tanaman sampel yang digunakan harus sesuai dengan kriteria yaitu sehat daun masih segar dan tidak layu dan tidak menunjukkan gejala penyakit karena dalam jaringan tanaman inang yang sakit biasanya didominasi oleh kapang patogen Atika, 2007. Sampel yang digunakan pada proses isolasi yaitu daun dari tanaman leunca Solanum nigrum. Daun tersebut diambil dari berbagai bagian yang berbeda, yaitu: daun bagian atas yang terdapat di bawah daun pucuk, daun bagian tengah, dan daun bagian bawah dekat dengan percabangan batang. Perbedaan bagian dalam pengambilan sampel ini bertujuan agar kapang endofit yang dihasilkan lebih banyak dan memberikan hasil yang beraneka ragam. Sampel selanjutnya dibersihkan dari debu, tanah, dan pengotor-pengotor lain dengan menggunakan air bersih yang mengalir lalu permukaan daun disterilisasi. Sterilisai permukaan merupakan proses kritis yang harus dilakukan sebelum melakukan penanaman daun ke media agar. Proses tersebut harus menjamin permukaan daun yang akan digunakan harus steril dan bebas dari kontaminasi, sehingga kapang yang tumbuh pada media isolasi merupakan kapang endofit Strobel, 2003. Pada penelitian ini digunakan larutan alkohol 70 dan NaOCl 5,25 sebagai desinfektan pada proses sterilisasi permukaan. Mekanisme kerja dari alkohol yaitu mendenaturasi protein dan melarutkan lemak pada membran protein sehingga dapat merusak sel mikroba. Proses tersebut memerlukan air sehingga alkohol 70 lebih baik dibandingkan alkohol absolut Siswando, 1995 dalam Ramadhan, 2011. NaOCl merupakan desinfektan yang biasa digunakan dalam prosedur sterilisasi permukaan Stone, Polishook White, 2004. Zat kimia ini termasuk ke dalam golongan halogen dengan mekanisme kerja mengoksidasi gugusan sulfhidril -SH secara ireversibel sehingga mengganggu reaksi enzimatis pada metabolisme mikroorganisme Volk Wheeler, 1988 dalam Ramadhan, 2011. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 4.1 Isolat Kapang Endofit Proses selanjutnya setelah sterilisasi permukaan adalah isolasi. Isolasi dilakukan dengan cara metode direct seed planting yaitu langsung menempelkan bagian tanaman pada media isolasi. Potongan daun pada media isolasi kemudian diinkubasi selama 14 hari dan diamati pertumbuhannya setiap hari. Koloni kapang yang tumbuh dapat dikatakan sebagai kapang endofit apabila memiliki ciri: waktu tumbuh lebih dari 5 hari, tumbuh disekitar sampel daun yang ditanam dan memiliki morfologi yang berbeda dari kapang yang tumbuh pada cawan petri kontrol Ramadhan, 2011. Media isolasi yang digunakan yaitu media PDA Potato Dextrose Agar. Media yang digunakan untuk pemurnian kapang endofit biasanya berupa media yang kaya akan nutrisi dan mudah dicerna oleh kapang tersebut. PDA merupakan media umum yang digunakan untuk menumbuhkan kapang. PDA dapat digunakan sebagai media isolasi Kumala et al., 2006 dan media peremajaan kapang endofit yang telah berhasil diisolasi. Pada media ini kapang akan lebih mudah tumbuh Ramadhan, 2011. Setiap kapang endofit yang berhasil tumbuh pada media isolasi kemudian dimurnikan dan diremajakan dengan menggunakan media PDA. Peremajaan kapang endofit merupakan hal yang harus dilakukan secara teratur. Hal ini dilakukan untuk mencegah kapang endofit berada pada fase kematian dipercepat dimana sel-sel yang mati lebih banyak dibandingkan sel yang hidup Gandjar et al., 2006 dalam Ramadhan, 2011. Berdasarkan variasi dari daun tanaman Solanum nigrum, maka diperoleh 14 isolat kapang endofit. Isolat-isolat tersebut dipilih dengan cara memilih isolat yang bebas kontaminasi, tumbuh secara maksimal dan berbeda satu sama lainnya secara mikroskopik. Daftar isolat dan gambar isolat kapang endofit yang dihasilkan dapat dilihat pada tabel 4.1 gambar 5 dan 6 halaman 55-56.