23
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilakukan di Lab Mikrobiologi, Laboratorium Farmakogosi dan Fitokimia, UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta. Program Studi Farmasi, Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri, Syarif Hidayatullah, Jakarta. Waktu pelaksanaan penelitian dimulai pada bulan Januari hingga bulai Mei
2015.
3.2 Alat
Laminar Air Flow minihelix II, cawan petri bulat normax, kertas saring, tabung reaksi pyrex, inkubator france etuves, shaker, alat sentrifus, blank disc
oxoid, vortex mixer, timbangan analitik, mikroskop cahaya shimadzu, autoklaf digital, micro pipet dan tip, jarum ose, ose bulat, beaker glass schott duran, gelas
ukur, pinset, hot plate, water bath, , bunsen, glass object, cover glass, jangka sorong tricle brand, magnetic stirrer, kaca arloji, batang pengaduk, spatula, labu
Erlenmeyer pyrex, spektrofotometri hitachi, oven memmert dan alat-alat lainnya yang umum digunakan di Laboratorium Mikrobiologi.
3.3 Bahan
3.3.1 Tanaman Uji
Sampel tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian daun dari Tanaman Leunca Solanum nigrum yang didapat Balittro, Bogor yang diambil
pada tanggal 20 Februari 2015. Kemudian bagian dari tanaman ini telah dideterminasi di Herbarium Bogoriense, LIPI, Cibinong, Bogor.
Sampel daun yang digunakan berjumlah 6 helai. Bagian daun yang digunakan dalam penelitian ini, diambil dari bagian yang berbeda yaitu daun bagian
atas yang terdapat di bawah daun pucuk, daun bagian tengah dan daun bagian bawah dekat dengan percabangan batang. Sampel daun yang digunakan harus
masih segar dan belum layu atau menguning. Sampel daun juga harus sehat tidak berpenyakit dan bebas dari kontaminasi.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 3.3.2
Bahan Kimia Sterilisasi Permukaan
Larutan natrium hipoklorit NaOCl 5,25, etanol 70, akuades steril
3.3.3 Media Pertumbuhan Mikroba
a. Media yang digunakan untuk isolasi kapang endofit yaitu: Potato Dextrose Agar PDA
b. Media yang digunakan untuk seleksi kapang yang berpotensi sebagai antibakteri: Nutrient Agar NA
c. Media yang digunakan untuk fermentasi kapang endofit: Potato Dextrose Broth PDB, Yeast Extract
d. Media yang digunakan untuk uji aktvitas antibakteri yaitu: Nutrient Agar
NA.
3.3.4 Bahan Uji Aktivitas Antibakteri
a Bakteri uji : Staphylococcus aureus ATCC 6538, Shigella dysentria ATCC
13313, Bacillus subtilis ATCC 6633, Salmonella enterica sv thypimurium ATCC 14028, dan Helicobacter pylori ATCC 43504 yang diperoleh dari
Labotarorium Mikrobiologi Farmasi Fakultas Farmasi UI. b
Bahan Pengenceran inokulum: NaCl fisiologis 0,9 Otsuka, akuades steril otsuka
c Bahan pewarnaan Gram: Karbol Kristal Ungu 0,5, cairan Lugol, etanol
96, Safranin 0,5.
3.3.5 Bahan untuk identifikasi kapang: pewarna Methylen blue
3.4. Cara Kerja 3.4.1 Persiapan Alat
Semua alat dan bahan yang digunakan dalam keadaan bersih dan steril. Sterilisasi dengan melewatkan alat di atas api bunsen sampai berpijar digunakan
untuk mesterilkan peralatan seperti ose, jarum, dan spatula. Sterilisasi dengan oven dilakukan dengan suhu 170
°C
selama 2 jam. Alat-alat yang disterilisasi dengan cara oven adalah cawan petri, beaker glass, erlenmeyer, dan tabung reaksi.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Sterilisasi dengan cara autoklaf dilakukan pada suhu 121
o
C selama 15 menit. Alat- alat yang disterilisasi dengan autoklaf adalah alat-alat presisi gelas ukur, pipet
volumetri Volk, 1988.
3.4.2 Pembuatan Medium Isolasi, Medium Peremajaan, dan Medium Pemeliharaan
3.4.2.1 Potato Dextrose Agar PDA plate Sesuai dengan
petunjuk penggunaan yang tercantum pada label PDA merek Merck, ditimbang Potato Dextrose Agar 39 gram dan ditakar 1 liter aquades. Bahan
dicampurkan dan diaduk dalam magnetik stirer. Disterilisasi dengan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121°C. Dituang ke dalam cawan petri, masing-masing
10 mL, biarkan media memadat Yulia, 2005.
3.4.2.2 Potato Dextrose Agar PDA slant Sesuai dengan
petunjuk penggunaan yang tercantum pada label PDA merek Merck, ditimbang Potato Dextrose Agar 39 gram, dan takar 1 liter aquades. Bahan
dicampurkan dan diaduk dengan pengaduk magnetik. Bahan dimasukkan ke dalam tabung slant masing-masing 10 mL. Disterilisasi dengan autoklaf selama 15 menit
dengan suhu 121°C. Media diletakkan dalam tabung dengan posisi miring ± 45°
dan biarkan media memadat Yulia, 2005.
3.4.3 Pembuatan Medium Perbanyakan
3.4.3.1. Pembuatan Potato Dextrose Broth PDB Media PDB dibuat dengan cara sejumlah kentang dikupas dan dipotong
menjadi dadu dan kemudian dicuci. Potongan kentang ditimbang 200 g masukkan dalam erlenmeyer dan didihkan dengan 1000 mL akuades. Diamkan hingga suhu
40
o
C kemudian disaring.
3.4.3.1 Pembuatan Nutrient Broth NB Sesuai dengan
petunjuk penggunaan yang tercantum pada label NB merek Merck, ditimbang Nutrient Broth 8 gram, dan takar 1 liter aquades. Bahan
Kategori