14
Bagan
10 gr + 90 ml diblender
Bahan pangan air pepton 0,1 2-5 menit
diencerkan 10
-2
s d 10
-5
0,1 ml 3 kali
Agar MH atau Agar Nutrient atau
Agar Standar Plate count 24 jam
suhu kamar hitung jumlah
koloni Gambar 8.2. Skema pemeriksaan jumlah bakteri pada bahan pangan
padat.
2. Bahan pangan cair
a. Diambil dengan pipet steril 10 ml bahan pangan cair dimasukkan
dalam tabung steril. b.
Ditambah 90 ml air pepton 0,1 . c.
Dibuat pengenceran bertingkat dengan cara sebagai berikut : 1
Diambil 1 ml larutan b ditambah 9 ml air pepton 0,1 . 2
Diambil 1 ml larutan 1 dit ambah 9 ml air pepton 0,1 . 3
Diambil 1 ml larutan 2 ditambah 9 ml air pepton 0,1 , dan seterusnya sampai diperoleh pengenceran yang sesuai.
d. Dilakukan pemanasan pada piring petri yang berisi Agar Muller’
Hinton atau Agar Nutrient atau Agar Standar Plate count dengan
15
Metode Plate Count yaitu cara hitung koloni kuman yang
tumbuh pada agar di dalam piring petri. Pada masing-masing pengenceran dilakukan 3 kali penamanan.
Untuk mendapatkan pert umbuhan koloni kuman yang menyebar sehingga mudah dihitung pada metode plate count ada beberapa cara
penanaman yaitu : 1
Cara pour plate penaburan
Dari larutan yang telah diencerkan sesuai dengan kebutuhan diambil 1 ml dimasukkan ke dalam piring petri steril.
a Telah disiapkan 20 ml Agar Muller Hinton atau Agar Nutrient
atau Agar Standar Plate count di dalam tabung reaksi dan dipanaskan pada suhu sekitar 50
o
C di dalam penangas air atau dengan cara merebus tabung yang berisi agar tersebut sehingga
agar dalam keadaan cair. b
20 ml agar cair a dituangkan ke dalam piring petri yang telah berisi 1 ml larutan yang telah diencerkan. Goyangkan pelan-
pelan supaya terjadi campuran yang meluas rata. c
Dieramkan selama 24 – 28 jam pada suhu 35 – 37
o
C. d
Dihitung jumlah koloni kuman. e
Jumlah koloni kuman unt uk masing-masing pengenceran adalah harga rata-rata dari jumlah koloni kuman hasil 3 kali
penanaman. f
Penghitungan koloni kuman dianggap masih cukup akurat apabila jumlah koloni yang dihitung antara 30 – 300 koloni
kuman pada setiap piring petri. g
Jumlah kuman dalam 1 ml bahan pangan cair = jumlah koloni e x faktor pengenceran.
Contoh : Jumlah koloni kuman rata-rata dari 3 kali pengenceran = 30 koloni, pada pengenceran 10
4
. Angka lempeng total
= 30 x 10
4
Catatan : Untuk mendapatkan hasil yang baik pada cara pour plate harus
diperhatikan : a
Selama mengerjakan piring petri dibuka seminimal mungkin untuk mencegah
16 kontaminasi.
b Waktu yang diperlukan untuk menuangkan media sampai
dengan mencampur tidak boleh lebih dari 20 menit supaya media tidak membeku.
c Setelah media dituangkan di dalam piring petri yang berisi 1 ml
bahan pangan cair yang telah diencerkan dikerjakan pencampuran dengan cara menggoyang pelan-pelan piring petri
keempat arah paling sedikit 5 kali. d
Diusahakan tut up piring petri tidak basah oleh media. e
Setelah media menjadi padat tanaman dipindah ke dalam alat pengeram dengan suhu 35 – 37
o
C. 2
Cara Spread Plate Perataan
Dari larutan yang telah diencerkan sesuai dengan kebutuhan diambil 0,1 ml diteteskan pada permukaan media Agar Muller Hinton atau
Agar Nutrient atau Agar Standar Plate count. a
Tetesan diratakan ke seluruh permukaan agar dengan menggunakan batang gelas bengkok steril.
b Dieramkan selama 24 – 28 jam pada suhu 35 – 37
o
C. c
Dihitung jumlah koloni kuman. d
Jumlah koloni kuman unt uk masing-masing pengenceran adalah harga rata-rata dari jumlah koloni kuman hasil 3 kali
penanaman. e
Penghitungan koloni kuman dianggap masih cukup akurat apabila jumlah koloni yang dihitung antara 30 – 300 koloni
kuman pada setiap piring petri. f
Jumlah kuman dalam 1 ml bahan pangan cair = jumlah koloni d x 10 x faktor pengenceran.
Contoh : Jumlah koloni kuman rata-rata dari 3 kali penanaman = 35 koloni, pada pengenceran 10
3
. Angka lempeng total = 35 x 10 x 10
3
= 35 x 10
4
Catatan :
Untuk mendapatkan hasil yang baik pada cara spread plate permukaan media Agar yang dipakai harus dalam keadaan
kering.
17 3
Cara Drops tetesan
Dari larutan yang telah diencerkan sesuai dengan kebutuhan diambil 20 μl dengan mikro pipet dan diteteskan pada permukaan media
Agar Muller Hinton atau Agar Nutrient atau Agar Standar Plate count. a
Dieramkan selama 24 – 28 jam pada suhu 35 – 37
o
C. b
Dihitung jumlah koloni kuman. c
Jumlah koloni kuman unt uk masing-masing pengenceran adalah harga rata-rata dari jumlah koloni kuman hasil 3 kali
penanaman. d
Penghitungan koloni kuman dianggap akurat pada seri pengenceran yang pert umbuhan koloninya tidak padat dan
mudah dilakukan penghit ungan. e
Jumlah kuman dalam 1 ml bahan pangan cair = Jumlah koloni c x
20 1000
x faktor pengenceran. Contoh : Jumlah koloni kuman rata-rata dari 3 kali penanaman = 30
koloni, pada pengenceran 10
4
. Angka lempeng total = 30 x 50 x 10
4
CFU ml
b. Metoda MPN
