3.8 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Total dengan Metode Pembentukan Kompleks Fosfomolibdenum
Metode pembentukan kompleks fosfomolibdenum merupakan metode yang digunakan untuk menentukan kapasitas antioksidan total yang dinyatakan sebagai
jumlah yang setara asam askorbat berdasarkan daya reduksi Mo VI menjadi Mo V oleh sampel analit dan selanjutnya pembentukan kompleks yang berwarna
hijau biru dari fosfat molibdenum yang mengandung antioksidan pada suasana asam Prieto., et al, 1999.
3.8.1 Pembuatan larutan induk baku vitamin C
Ditimbang vitamin C sebanyak 100 mg kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml, dan dilarutkan dengan akuades sampai garis tanda. Diperoleh
konsentrasi vitamin C pada Larutan Induk Baku LIB I adalah 1000 µgml.
3.8.2 Penentuan panjang gelombang maksimum
Dipipet 7 ml dari LIB I, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan dengan akuades sampai garis tanda konsentrasi 140 µgml.
Kemudian dipipet 0,5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan 5 ml larutan pereaksi fosfomolibdenum. Diperoleh konsentrasi vitamin C pada larutan
ini adalah 12,727 µgml. Kemudian tabung ditutup, dipanaskan di penangas air selama 60 menit pada suhu 90ºC dan didinginkan pada suhu kamar. Kemudian
diukur absorbansinya pada panjang gelombang 400-750 nm.
3.8.3 Penentuan waktu kerja operating time
Dipipet 7 ml dari LIB I, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan dengan akuades sampai garis tanda konsentrasi 140 µgml.
Kemudian dipipet 0,5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan 5 ml larutan pereaksi fosfomolibdenum. Diperoleh konsentrasi vitamin C pada larutan
Universitas Sumatera Utara
ini adalah 12,727 µgml. Kemudian tabung ditutup, dipanaskan di penangas air selama 60 menit pada suhu 90ºC, didinginkan pada suhu kamar dan diukur
absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh diatas.
3.8.4 Pengukuran kurva kalibrasi vitamin C
Dipipet 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml, dan 8 ml dari LIB I, masing-masing dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml, diencerkan dengan akuades hingga garis
tanda sehingga konsentrasi vitamin C yang diperoleh adalah 80 µgml, 100 µgml, 120 µgml, 140 µgml, 160 µgml. Kemudian dipipet masing-masing 0,5 ml
dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 5 ml larutan pereaksi fosfomolibdenum. Diperoleh konsentrasi vitamin C pada larutan ini adalah 7,273
µgml, 9,091 µgml, 10,909 µgml, 12,727 µgml, 14,545 µgml. Kemudian tabung ditutup, dipanaskan di penangas air pada suhu 90ºC selama 60 menit,
didinginkan pada suhu kamar dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum dalam waktu kerja yang diperoleh.
3.8.5 Uji kapasitas antioksidan total sampel uji
Kategori