Massa Perlakuan Persiapan Sampel Darah dan Organ

23

e. Analisis Serum Darah dan Organ Tikus

1 Analisis Total Kolesterol Metode CHOD-PAP Prinsip pengujian ini adalah mereaksikan kolesterol secara hidrolisis enzimatis dan oksidasi. Hasil reaksi tersebut menghasilkan senyawa quinine yang berwarna merah, sehingga dapat dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 500 nm. Prosedur analisis disajikan pada Gambar 2. Komposisi reagen kolesterol terdapat di Tabel 8. Nilai kadar kolesterol didapat dari persamaan berikut : Kadar kolesterol mg dl A sampel A standar 200 mg dl Gambar 4. Prosedur Analisis Total Kolesterol. Tabel 8. Komposisi Reagen Kolesterol Komposisi Jumlah Good’s buffer pH 6,7 50 mmoll Phenol 5 mmoll 4-aminoantipyrine 0,3 mmoll Kolesterol esterase _ 200 UI Kolesterol oksidase _50 UI Poroksidase _ 3 kUI Standar 200 mgdl 5,2 mmoll 2 Analisis High Density Lipoprotein HDL Metode CHOD-PAP Prinsip penentuan HDL yaitu mengendapkan kilomikron, VLDL, dan LDL dengan menambahkan asam fosfotungstat dan ion Mg. Proses sentrifugasi akan menghasilkan hanya HDL dalam supernatan yang kemudian ditentukan secara enzimatis menggunakan DSI cholesterol FS. Prosedur analisis disajikan pada Gambar 3 dan Gambar 4. Komposisi reagen presepitasi terdapat di Tabel 9. Nilai kadar HDL didapat dari persamaan berikut : 0,01 ml serumstandar ditambah 1 ml reagen kolesterol Dicampur Diinkubasi pada suhu 37 o C, 5 Dibaca absorbansi A pada λ 500 24 Kadar HDL + ,- . 01- . 2 3, 4 200 + ,- Gambar 5. Prosedur Persiapan Sampel Analisis Kadar HDL. Gambar 6. Prosedur Analisis Total HDL. Tabel 9. Komposisi Reagen Presepitasi Komposisi Jumlah Asam fosfotungstat 1,4 mmoll Magnesium klorida 8,6 mmoll Standar kolesterol 0,3 mmoll Standar kolesterol 200 mgdl 5,2 mmoll 3 Analisis Trigliserida Metode GPO-PAP Analisis kandungan trigliserida dapat dilihat pada Gambar 5. Komposisi reagen trigliserida yang digunakan tertera pada Tabel 10. Kadar trigliserida didapat dari hasil perhitungan berikut : Kadar TG + ,- . 01- . 2 3, 4 200 + ,- 4 Analisis Low Density Lipoprotein LDL Friedward et al. 1972 Kadar LDL dihitung secara langsung menggunakan rumus : 200 µl serum ditambah 500 µl reagen Dicampur Diinkubasi pada suhu kamar selama 10 Disentrifuse 3578 x g, 10 Supernatan siap 100 µl supernatanstandar ditambahkan 1 ml pereaksi Dicampur Diinkubasi pada suhu 37 o C, 5 Dibaca absorbansi A pada λ 500