23
e. Analisis Serum Darah dan Organ Tikus
1 Analisis Total Kolesterol Metode CHOD-PAP
Prinsip pengujian ini adalah mereaksikan kolesterol secara hidrolisis enzimatis dan oksidasi. Hasil reaksi tersebut menghasilkan
senyawa quinine yang berwarna merah, sehingga dapat dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 500 nm. Prosedur analisis
disajikan pada Gambar 2. Komposisi reagen kolesterol terdapat di Tabel 8. Nilai kadar kolesterol didapat dari persamaan berikut :
Kadar kolesterol mg
dl A sampel
A standar 200 mg
dl
Gambar 4. Prosedur Analisis Total Kolesterol. Tabel 8. Komposisi Reagen Kolesterol
Komposisi Jumlah
Good’s buffer pH 6,7 50 mmoll
Phenol 5 mmoll
4-aminoantipyrine 0,3 mmoll
Kolesterol esterase _ 200 UI
Kolesterol oksidase _50 UI
Poroksidase _ 3 kUI
Standar 200 mgdl 5,2 mmoll
2 Analisis High Density Lipoprotein HDL Metode CHOD-PAP
Prinsip penentuan HDL yaitu mengendapkan kilomikron, VLDL, dan LDL dengan menambahkan asam fosfotungstat dan ion
Mg. Proses sentrifugasi akan menghasilkan hanya HDL dalam supernatan
yang kemudian
ditentukan secara
enzimatis menggunakan DSI cholesterol FS. Prosedur analisis disajikan pada
Gambar 3 dan Gambar 4. Komposisi reagen presepitasi terdapat di Tabel 9. Nilai kadar HDL didapat dari persamaan berikut :
0,01 ml serumstandar ditambah 1 ml reagen kolesterol Dicampur
Diinkubasi pada suhu 37
o
C, 5 Dibaca absorbansi A pada λ 500
24
Kadar HDL
+ ,-
. 01- . 2 3, 4
200
+ ,-
Gambar 5. Prosedur Persiapan Sampel Analisis Kadar HDL.
Gambar 6. Prosedur Analisis Total HDL. Tabel 9. Komposisi Reagen Presepitasi
Komposisi Jumlah
Asam fosfotungstat 1,4 mmoll
Magnesium klorida 8,6 mmoll
Standar kolesterol 0,3 mmoll
Standar kolesterol 200 mgdl 5,2 mmoll
3 Analisis Trigliserida Metode GPO-PAP
Analisis kandungan trigliserida dapat dilihat pada Gambar 5. Komposisi reagen trigliserida yang digunakan tertera pada Tabel 10.
Kadar trigliserida didapat dari hasil perhitungan berikut : Kadar TG
+ ,-
. 01- . 2 3, 4
200
+ ,-
4 Analisis Low Density Lipoprotein LDL Friedward et al. 1972
Kadar LDL dihitung secara langsung menggunakan rumus : 200 µl serum ditambah 500 µl reagen
Dicampur Diinkubasi pada suhu kamar selama 10
Disentrifuse 3578 x g, 10 Supernatan siap
100 µl supernatanstandar ditambahkan 1 ml pereaksi Dicampur
Diinkubasi pada suhu 37
o
C, 5 Dibaca absorbansi A pada λ 500