UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4.4 Pembuatan Reagen untuk Uji Antiinflamasi
a. Pembuatan TBS Tris Buffer Saline pH 6,3
Sebanyak 1,21 g Tris base dan 8,7 g Natrium klorida NaCl dilarutkan dalam 1.000 mL aquades. Terbentuklah larutan dapar dengan
pH sekitar 10. Kemudian pH di adjust hingga 6,3 dengan menggunakan
asam asetat glasial Mohan, 2003. b.
Penyiapan variasi konsentrasi dari Natrium diklofenak sebagai kontrol positif
Pembuatan larutan induk sebesar 10.000 ppm Natrium diklofenak dalam pelarut metanol. Kemudian dilakukan pengenceran dari larutan
induk sehingga didapatkan variasi konsentrasi 1.000, 100, dan 10. Untuk membuat 10.000 ppm dilakukan dengan melarutkan 50 mg
Natrium diklofenak dalam 5 mL metanol. Selanjutnya dilakukan
pengenceran dari larutan induk, yaitu:
1.000 ppm: Sebanyak 500 L dari larutan induk di tambahkan
4. 500 L metanol.
100 ppmμ Sebanyak 50 L dari larutan induk di tambahkan 4.950
L metanol.
10 ppmμ Sebanyak 5 L dari larutan induk di tambahkan 4.λλ5 L metanol.
c. Penyiapan variasi konsentrasi dari etil p-metoksisinamat dan
senyawa hasil modifikasi
Pembuatan larutan induk sebesar 10.000 ppm etil p- metoksisinamat dan senyawa hasil modifikasi dengan pelarut metanol.
Kemudian dilakukan pengenceran dari masing-masing larutan induk sehingga didapatkan variasi konsentrasi 1.000, 100, dan 10 ppm. Untuk
membuat 10.000 ppm dilakukan dengan melarutkan 50 mg sampel dalam 5 mL metanol. Selanjutnya dilakukan pengenceran dari larutan
induk, yaitu:
1.000 ppmμ Sebanyak 500 L dari larutan induk di tambahkan
4. 500 L metanol.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
100 ppmμ Sebanyak 50 L dari larutan induk di tambahkan 4.950
L metanol.
10 ppmμ Sebanyak 5 L dari larutan induk di tambahkan 4.λλ5 L metanol.
d. Pembuatan Larutan BSA 0,2 mv
Sebanyak 0,5 g BSA dilarutkan dalam 250 mL Tris Buffer Saline
TBS pH 6,3 Williams et al, 2008.
3.4.5 Uji In vitro Antiinflamasi Williams et al, 2008
Tahapan pengujian aktivitas senyawa hasil modifikasi terhadap denaturasi Bovine Serum Albumin adalah sebagai berikut:
a. Pembuatan Larutan Uji
Sebanyak 5 mL larutan uji terdiri dari 4.950 L BSA dan 50 L
larutan sampel. Larutan uji dibuat berbagai macam konsentrasi, yaitu:
100 ppm: Sebanyak 50 L dari larutan sampel 10.000 ppm
ditambahkan dengan 4.
λ50 L larutan BSA.
10 ppm: Sebanyak 50 L dari larutan sampel 1.000 ppm
ditambahkan dengan 4.
λ50 L larutan BSA.
1 ppm: Sebanyak 50 L dari larutan sampel 100 ppm ditambahkan
dengan 4.
λ50 L larutan BSA.
0,1 ppm: Sebanyak 50 L dari larutan sampel 10 ppm ditambahkan
dengan 4.
λ50 L larutan BSA. b.
Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Sebanyak 5 mL larutan kontrol negatif terdiri dari 4.950 L BSA
dan 50
L metanol pro analisis. c.
Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Sebanyak 5 mL larutan kontrol positif terdiri dari 4.950 L BSA
dan 50 L larutan Natrium diklofenak. Larutan kontrol positif dibuat
berbagai macam konsentrasi, yaitu:
100 ppmμ Sebanyak 50 L dari larutan kontrol positif 10.000 ppm
ditambahkan dengan 4.
λ50 L larutan BSA.