36
diukur total padatan terlarutnya. Diagram ekstraksi gula dan oligosakarida dapat
dilihat pada Gambar 9.
Gambar 9 Diagram ekstraksi gula dan oligosakarida.
F. PENGUJIAN POTENSI PREBIOTIK EKSTRAK COOKIES UBI GARUT SECARA IN VITRO
1. Pertumbuhan BAL dalam Ekstrak Cookies Ubi Garut.
Tujuan dari tahap ini adalah menguji potensi ekstrak cookies ubi garut dalam mendukung pertumbuhan BAL. Sebagai pembanding digunakan ekstrak ubi garut
segar. Jenis BAL yang digunakan adalah Bifidobacterium bifidum, B. longum, L.casei
Shirota, L.casei Rhamnosus, Lactobacillus F1 dan G3. Media yang digunakan sebagai media pertumbuhan adalah media cair MRS basis tetapi
glukosa media diganti dengan ekstrak tepung ubi garut atau ekstrak cookies ubi garut. Sebagai pembanding digunakan standar gula yaitu glukosa. Sebagai kontrol
digunakan MRS basis tanpa komponen gula. Media MRS basis ditempatkan pada tabung reaksi sebanyak 9 ml
kemudian ditambahkan 1 ml ekstrak tepung ubi garut atau cookies ubi garut steril dengan TPT sebesar 5 sehingga konsentrasi ekstrak dalam media adalah 0.5.
Ekstrak gula dan oligosakarida
Ekstraksi dengan pelarut etanol 70, menggunakan magnetic stirrer,
t = 15 jam Penyaringan dengan kertas saring
dan pencucian dengan etanol 70
Sentrifuse 2000 x g selama 10 menit Filtrat dipekatkan dengan evaporator vakum T = 40
o
C Tepung ubi garut
atau ubi jalar atau SPF
37
Kultur dari masing-masing BAL ditambahkan ke dalam media yang mengandung ekstrak gula atau glukosa sebanyak 0.1 ml 1. Untuk menghindari kontaminasi
maka masing-masing dibuat dua tabung dalam setiap hari pengamatan yang akan diamati pada 0 jam dan 24 jam perlakuan. Inkubasi secara aerob untuk
Lactobacillus dan secara anaerob dalam anaerobik jar untuk Bifidobacterium
dalam inkubator 37
o
C. Untuk membuat kondisi anaerob, digunakan alat ANOXOMAT
Gambar 6. Perhitungan jumlah BAL dihitung setelah diinkubasi selama 48 jam.
Kontrol dikerjakan melalui tahapan yang sama dengan pengerjaan perlakuan ekstrak tepung ubi garut atau cookies ubi garut ditambahkan 0.1 ml
kultur tetapi pada media tidak ditambahkan sumber gula standar gula maupun ekstrak ubi garut atau cookies ubi garut. Bakteri asam laktat dengan pertumbuhan
terbaik pada ekstrak tepung ubi garut dan cookies ubi garut dipilih untuk digunakan pada pengujian selanjutnya.
2. Kompetisi Patogen dengan BAL dalam Media yang Mengandung Ekstrak Ubi Garut.
