E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi dan pembuatan simplisia jarak cina.
Determinasi tanaman jarak cina terlebih dahulu dilakukan sebelum masuk pada tahap ekstraksi batang dari tanaman jarak cina. Persiapan bahan
baku yang dilakukan berupa batang mula-mula dipilih dan dicuci sampai bersih dan diiris tipis-tipis. Kemudian pengeringan dengan dijemur di bawah sinar
matahari dan ditutup dengan kain hitam sampai batang jarak cina kering. Setelah kering bahan kemudian diblender sampai halus dan diayak dengan
menggunakan ayakan mesh no. 40. Bahan yang tidak tersaring di mesh no. 40 diblender kembali supaya lebih halus sehingga dapat digunakan Sari dan Sari,
2011.
2. Ekstraksi batang jarak cina
Setelah diblender dan diayak bahan baku siap untuk digunakan dalam
proses ekstraksi. Sebuk batang jarak cina ditimbang 120 g dimasukan dalam
erlenmeyer etanol 70 1 L untuk 120 g diamkan selama 2 hari, sesudah itu disaring, ambil filtrat hasil maserasi dan dipekatkan hingga didapatkan ekstrak
kental.
3. Uji kualitatif tanin
Uji kualitatif tanin dilakukan dengan menggunakan ekstrak etanol batang jarak cina 8 g yang mengandung etanol 70 disaring dan dikeringkan
pada penangas air. Residu ekstrak dilarutkan dengan 20 mL air panas. Ekstrak dibagi menjadi 2 tabung reaksi. Satu buah tabung untuk kontrol dan tabung
lainnya untuk uji ferri klorida. Tabung reaksi untuk identifikasi tanin
ditambahkan dengan 3 tetes reagen FeCl
3
. Tanin yang terhidrolisis memberikan warna biru atau biru kehitaman, sedang tanin yang terkondensasi
berwarna biru hijau. Kemudian dilakukan penegasan dengan menambahkan 3 tetes larutan gelatin dan amati endapan protein yang terjadi Maula, 2014.
4. Uji antibakteri
a. Pembuatan stok bakteri Staphylococcus aureus. Sebanyak 7,6 g media Muller Hinton Agar MHA disuspensikan ke dalam 200 mL akuades.
Sebanyak 5 mL media MHA dimasukan kedalam tabung reaksi, kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf suhu 121
o
C selama 15 menit. Setelah steril, tabung reaksi disimpan pada kemiringan 30-45
o
dan media dibiarkan memadat. Satu ose biakan murni Staphylococcus aureus diambil
lalu diinokulasikan pada media agar miring secara zig-zag dan diinkubasi selama 2 hari pada suhu suhu 37
o
C. b. Pembuatan suspensi bakteri Staphylococcus aureus. Sebanyak 1 ose
koloni bakteri Staphylococcus aureus dari stok bakteri dimasukan kedalam tabung reaksi yang berisi NaCl 0,9. Kekeruhan suspensi bakteri
disesuaikan dengan kekeruhan standar 0,5 McFarland 1,5x10
8
CFUmL. c. Pembuatan konsentrasi ekstrak etanol batang jarak cina 5. Ekstrak etanol
batang jarak cina diambil sebanyak 5 g, kemudian dilarutkan dalam 100 mL akuades.
d. Pengujian potensi antibakteri ekstrak etanol batang jarak cina. Media MHA steril disiapkan ke dalam cawan petri lalu tunggu hingga memadat.
Suspensi bakteri Staphylococcus aureus dimasukan pada media MHA
yang telah memadat dengan menggunakan cotton bud steril. Oleskan suspensi bakteri tersebut dengan merata. Pada media MHA yang telah
dioleskan suspensi bakteri, dibuat lubang sumuran dengan menggunakan pelubang sumuran. Ekstrak etanol batang jarak cina diambil 5 50 µL
dengan menggunakan spuit dan diletakan kedalam lubang sumuran tersebut. Lakukan tiap tahapan secara aseptis. Cawan petri tersebut
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 C di dalam inkubator. Dilakukan
replikasi sebanyak 3 kali. Pengujian potensi antibakteri ekstrak etanol batang jarak cina dibandingkan dengan kontrol negatif yang berisi media
MHA bakeri Staphylococcus aureus, kemudian pelarut yang digunakan sebagai kontrol negatif yaitu akuades.
5. Formula krim
Kategori