77 LAMPIRAN 15. Analisa Coliform
I. Alat : - neraca
- sendok - pipet ukur
- tabung reaksi - vortex mixer
- Incubator II. Bahan
: -
Tryptic Soy Broth TSB -
Lauryl Sulfate Tryptose Broth LSTB -
Lactose Bile Brilliant Green Broth LBBGB -
Larutan peptone 0.1
III. Cara kerja :
1. Timbang sampel susu bubuk sebanyak 6 gram dan larutkan dalam 54 ml
larutan TSB 2.
Pipet 10 ml larutan sampel yang telah diencerkan dan masukkan dalam 3 tabung media LSTB double strength.
3. Pipet 1 ml larutan sampel yang telah diencerkan dan masukkan dalam
3 tabung media LSTB single strength. 4.
Pipet 1 ml larutan sampel yang telah diencerkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml larutan pepton 0.1 , kemudian dikocok dengan vortex
mixer selama 5-10 detik. Pipet 1 ml dan masukkan dalam 3 tabung media LSTB single strength.
5. Ulangi seperti pada langkah no 4 untuk pengenceran yang dibutuhkan
dan setiap kali dilakukan pemipetan 1 ml dari larutan hasil pengenceran yang diperoleh dari 1 ml pengenceran sampel sebelumnya ke dalam 9 ml
dari larutan pepton 0.1 .
6. Siapkan larutan blank control yaitu larutan media tanpa inokulasi.
7. Kocok secara hati-hati masing-masing inokulum.
8. Inkubasi larutan single broth secara aerob pada suhu 30°
± 1
o
C selama 24 ± 2 jam. Apabila tidak terlihat pembentukan gas maupun kekeruhan
maka inkubasi diperpanjang lagi selama 24 ± 2 jam.
78 9.
Inkubasi larutan double broth secara aerob pada suhu 30° ± 1
o
C selama 24 ± 2 jam.
10. Baca hasil pengamatan
11. Tes konfirmasi : Inokulasi sebanyak 1 ose dari media single broth yang
ada pembentukan gas atau media yang berubah menjadi keruh ke dalam media LBBGB dan inkubasi pada suhu 30°
± 1
o
C selama 24 ± 2 jam. Bila tidak ada pembentukan gas, maka inkubasi diperpanjang lagi 24 ± 2
jam
12. Inokulasi 1 ose dari media double broth tersebut ke dalam media
LBBGB dan inkubasi pada suhu 30° ± 1
o
C selama 24 ± 2 jam. Bila tidak ada pembentukan gas, maka inkubasi diperpanjang lagi 24 ± 2 jam.
13. Periksa tabung LBBGB apakah ada pembentukan gas
14. Coliform positif bila pada tabung LSTB terjadi pembentukan gas atau
media jadi keruh, dan pada tabung LBGBB terjadi pembentukan gas. 15.
Hasil dari analisa dilihat pada seri pengenceran.dengan memperhatikan peraturan sebagai berukut:
a. Jika salah satu pengenceran memberikan hasil 3 tabung positif
artinya hasil konfirmasi Coliform positif maka: -
pilih pengenceran tertinggi dari 3 tabung dan juga semua tabung pada 2 pengenceran yang tertinggi berikutnya
- jika pengenceran tertinggi berikutnya tidak dilakukan analisa
maka pilih semua tabung dati hasil pengenceran tertinggi yang dianalisa
b. Jika tidak ada pengenceran yang memberikan hasil 3 tabung
positif, maka pilih pengenceran tertinggi yang memberikan hasil 1 tabung positif dan ditambah dengan semua tabung pada 2
pengenceran yang lebih tinggi berikutnya
c. Jika peraturan a dan b tidak dapat dipakai maka
- pilih semua tabung dari pengenceran terendah yang tidak
memberikan hasil positif ditambah semua tabung berikutnya dari 2 pengenceran lebih rendah yang dianalisa
- jika tabung yang positif hanya ditemukan pada pengenceran
terendah maka pilih semua tabung dari pengenceran ini ditambah semua tabung pada pengenceran berikutnya dari
dua pengenceran lebih tinggi yang dianalisa
16. Sebagai contoh Tabel 15 merupakah hasil rekonstitusi produk pada
pengenceran 10
-1