Uji Proliferasi Sel Limfosit
suspensi sel dipindahkan ke dalam flask dengan media pertumbuhan 5 ml, lalu diinkubasi pada inkubator dengan 5 CO
2
pada suhu 37
o
C.
Sel Selapis monolayer : Pemeliharaan sel selapis sama dengan sel
suspensi, hanya dalam pencucian atau pergantian media di dalam flask diperlukan larutan enzim tripsin 0.02 di dalam 0,5 EDTA-PBS, untuk pengangkatan sel
yang melekat pada dinding flask. Media yang akan diganti mula-mula di buang semua sehingga hanya tersisa sel yang melekat di dinding flask, kemudian
ditambahkan larutan tripsin sebanyak 500 µl untuk volume kultur 5 ml dan diinkubasi pada inkubator selama 8 delapan menit. Sel yang menempel akan
terlepas, kemudian ditambahkan PBS secukupnya sebelum suspensi sel dipindahkan ke dalam tabung sentrifus dan dilakukan prosedur pencucian sel
seperti yang telah dilakukan pada sel suspensi.
7. Pengujian Aktivitas Anti Proliferasi Sel Kanker Secara in vitro Media Sel Kanker. Media DMEMF 12 Dulbecco s Modified Eagle
Medium bubuk sebanyak 10 gram dimasukkan ke dalam botol steril yang berisi 900 ml aquabides steril dan dihomogenisasi dengan stirer tanpa pemanasan.
Selanjutnya ditambahkan 12 gram NaHCO
3
, antibiotik penisilin-streptomisin 0,2, dihomogenisasi kembali dan ditambahkan akuabides sampai larutan media
menjadi 1000 ml. Media disaring menggunakan kertas saring steril ukuran 0,22 m secara aseptik dan hasil penyaringan dimasukkan dalam botol steril dan
disimpan dalam lemari es pada suhu 2 8
o
C sampai digunakan kembali. Apabila akan digunakan sebagai media tumbuh media DMEMF12 ditambahkan 10 FCS
Rusmarilin, 2003 Perhitungan sel dilakukan setelah pewarnaan sel oleh Tripan biru seperti
cara perhitungan sel limfosit yang telah dijelaskan. Suspensi sel 1 x 10
5
selml dimasukkan ke dalam sumur-sumur microplate sebanyak 180 l tiap sumur.
Hidrolisat yang mengandung senyawa-senyawa oligomer dengan konsentrasi sebesar 125 µgml ditambahkan dalam sumur sebanyak
20 l. Penggunaan kontrol positif anti kanker Doxorubicin dengan konsentrasi 5 µgml sebanyak 20
l, sedangkan kontrol negatif hanya berisi suspensi sel dan media. Jumlah total
volume dalam tiap sumur sebanyak 200 l. Kultur diinkubasi pada inkubator dengan kondisi 5 CO
2
, 37
o
C, dan
?
la tive h
u m
id ity
RH 90 selama 4 hari Wahyuni, 2006.
Setelah masa inkubasi berakhir dilakukan pengujian dengan metode MTT, seperti pada pengujian MTT dengan sel limfosit, kemudian
Hasil analisis ditentukan dengan membaca o
p tica
l d en
sity OD pada ELISA rea
d er
pada panjang gelombang 595 nm Kawaii, 1999.
Data absorbansi perlakuan masing-masing menggunakan ulangan sebanyak 3 kali, dihitung dan dikonversi ke rumus :
- Untuk penghambatan proliferasi sel kanker : Penghambatan =
100