Penyiapan hewan uji Perhitungan dan penetapan dosis Pembuatan suspensi karagenin 1 Pembuatan larutan Na diklofenak

5. NaCl fisiologis 0,9 Otsuka sebagai pensuspensi karagenin yang diperoleh dari Apotek Kimia Farma. 6. Aquadest sebagai pelarut jamu ”T” dan Natrium Diklofenak yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

D. Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain sebagai berikut : 1. Alat – alat gelas seperti beker glass, labu takar, gelas ukur, pengaduk bermerk Pyrex Iwaki Glass, Japan 2. Spuit injeksi oral 0,1 – 1,0 ml yang ujungnya diberi bulatan kecil dengan lubang ditengahnya agar tidak melukai hewan uji 3. Spuit injeksi subplantar 0,1 – 1,0 ml 4. Neraca analitik dengan Mettler Toledo AB 204 5. Gunting bedah

E. Tata Cara Penelitian

1. Penyiapan hewan uji

Hewan uji yang dibutuhkan adalah 75 ekor mencit betina galur Swiss, umur 2 – 3 bulan, berat badan 20 – 30 g. Hewan uji dibagi secara acak menjadi 2 kelompok. Kelompok untuk orientasi sebanyak 45 ekor dan kelompok perlakuan sebanyak 30 ekor. Sebelum digunakan, hewan uji dipuasakan selama 18 – 24 jam tanpa menghentikan pemberian minum. Kelompok perlakuan terdiri dari 6 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI kelompok yang masing – masing terdiri dari 5 ekor, untuk perlakuan kontrol negatif karagenin 1 , kontrol negatif aquadest sebagai pelarut jamu ”T” dan Natrium Diklofenak, kontrol positif natrium diklofenak, dan kelompok perlakuan sediaan seduhan Jamu ”T” dalam 3 peringkat dosis.

2. Perhitungan dan penetapan dosis

a. Karagenin

Menurut Williamson dkk 1996, konsentrasi karagenin yang digunakan pada mencit adalah 1 dengan volume 0,05 ml. 0,05 ml karagenin 1 adalah volume pemberian untuk mencit dengan berat 20 g sehingga dosis bisa dicari dengan rumus: V ml = ml mg C kg BB x BB kg mg D 0,05 ml = ml mg kg x BB kg mg D 10 02 , D = 25 mgkg BB dan V = {2,5 x BB kg} ml b. Natrium diklofenak Dosis natrium diklofenak yang digunakan pada penelitian anti-inflamasi yaitu 4,48 mgkg BB. Dosis ini berdasarkan hasil penelitian Maryanto 1997 dengan cara perhitungan : dosis untuk tikus 250 g = 40 mgkg BB dosis untuk tikus 200 g = BB mgkg 32 40 x 250 200 = konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g = 0,14 x 32mgkg BB = 4,48 mgkg BB PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

3. Pembuatan suspensi karagenin 1

Timbang 100 mg karagenin, larutkan dengan larutan NaCl fisiologis 0,9 dalam labu takar 10 ml sehingga diperoleh konsentrasi suspensi karagenin 1 sebagai zat inflamatogen pada kaki mencit. Apabila akan digunakan kembali sebaiknya diletakkan dalam almari es.

4. Pembuatan larutan Na diklofenak

Natrium diklofenak yang digunakan dalam penelitian ini berupa tablet sehingga perlu dilakukan uji keseragaman bobot terlebih dahulu. Uji keseragaman bobot Timbang 20 tablet, hitung bobot rata-rata tiap tablet. Jika ditimbang satu per satu, tidak boleh lebih dari 2 tablet yang masing-masing bobotnya menyimpang dari bobot rata-ratanya lebih besar dari harga yang ditetapkan kolom A, dan tidak satu tablet pun yang bobotnya menyimpang dari bobot rata-ratanya lebih dari harga yang ditetapkan kolom B. Jika tidak mencukupi 20 tablet, dapat digunakan 10 tablet; tidak satu tablet pun yang bobotnya menyimpang lebih besar dari bobot rata-rata yang ditetapkan kolom A dan tidak satu tablet pun yang bobotnya menyimpang lebih besar dari bobot rata-rata yang ditetapkan kolom B. Bobot rata-rata Penyimpangan bobot rata-rata dalam A B 25 mg atau kurang 26 mg sampai dengan 150 mg 151 mg sampai dengan 300 mg Lebih dari 300 mg 15 10 7,5 5 30 20 15 10 Anonim,1979 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Untuk memperoleh zat aktif Natrium diklofenak dari tablet generik tersebut kemudian dilakukan perhitungan dengan cara : Dosis Natrium diklofenak yang digunakan dalam penelitian ini sebesar 4,48 mgkg BB Maryanto, 1997 sehingga konsentrasi Natrium diklofenak yang diharapkan : ml g10 0,0027 ml mg10 2,7 C mgml 0,27 C ml 0,5 g 30 x mgkg 4,48 C V BB x D C = = = = = Tablet generik Natrium diklofenak mengandung 25 mg zat aktif Natrium diklofenak. Tablet yang akan digerus sejumlah 4 tablet maka konsentrasi natrium diklofenak dalam tablet tersebut sebesar 0,1 g 10 ml. Banyaknya serbuk yang akan ditimbang untuk mendapatkan zat aktif Natrium diklofenak dengan konsentrasi 0,0027 g10 ml yaitu dengan perhitungan : digerus yang tablet berat total x B A Keterangan : A : jumlah Na Diklofenak yang diinginkan B : jumlah Na Diklofenak pada kemasan x jumlah tablet yang digerus Misalnya, berat total 4 tablet yang digerus = 0,7456 gram maka : gram 02 , 7456 , x ml g10 0,1 ml g10 0,0027 = g Banyaknya serbuk hasil pengerusan tablet Natrium diklofenak yang ditimbang sebanyak 0,02 gram. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Ditimbang seksama sejumlah serbuk tablet Natrium diklofenak berdasarkan hasil perhitungan dan dilarutkan dalam aquadest sampai diperoleh konsentrasi tertentu menggunakan labu ukur 10 ml.

1. Penetapan dosis sediaan seduhan jamu ”T”