Tabel 5.7 Ekspresi MnP, LiP dan lakase Uml Pleurotus EB9 dengan substrat kayu sengon dengan kondisi media digoyang dalam bioreaktor dengan
Pleurotus EB9-AS, Pleurotus EB9-F dan isolat Pleurotus EA4-AS
Lama Inkubasi Mn-P
Li-p Lakase
H0 0,041 0,224
H1 0,05 0,0701
0,623 H2 0,048
0 0,891 H3 0,083
0 0,694 H4 0,117
0 0,926 H5 0,124
0,06 0,836
H6 0,213 0 0,97
EB9-AS 0,138 0,914
EB9-F 0,062 0 EA4-AS 0
0,179 0,086
Keterangan: EB9-AS: Produksi enzim Pleurotus EB9 yang sudah diberi 40 amonium sulfat; EB9-F: Produksi enzim pada Pleurotus EB9-AS diperoleh peak pada fraksi ke 96
yang kemudian diambil; EA4-AS: Produksi skala besar isolat Pleurotus EA4 yang sudah diberi amonium sulfat 40
2. Tahap Pemurnian Dengan Kolom Kromatografi Cair
Penelitian isolasi MnP isolat Pleurotus EB9 dan Pleurotus EA4 dimulai dengan kromatografi kolom dan SDS-PAGE fraksi hasil kromatografi kolom
tersebut. Untuk isolat Pleurotus EA4 menggunakan kromatografi kolom terbuka penukar ion dengan matriks DEAE dan matriks Phenyl, sedang untuk Pleurotus
EB9 menggunakan kromatografi kolom terbuka penukar ion dengan matriks DEAE.
Hasil ekstraksi dan purifikasi enzim kasar Pleurotus EA4, pada perlakuan inkubasi 4 hari maupun 12 hari tidak diperoleh pita-pita yang menunjukkan
keberadaan MnP atau enzim, walaupun sudah ditambahkan amonium sulfat 40. Hal ini menunjukkan bahwa isolat Pleurotus EA4 tidak menghasilkan MnP,
sehingga tidak dilakukan eksperimen lebih lanjut Gambar 5.6. Isolasi enzim MnP Pleurotus EB9 yang difermentasi 6 hari tanpa diberi
amonium sulfat tidak menghasilkan enzim karena diduga konsentrasinya kurang pekat. Setelah diberi amonium sulfat 40, diperoleh beberapa fraksi enzim dari
mulai enzim kasar sampai hasil elusi 0,1, 0,2, 0,3 dan 0,4 NaCl dan pita dengan bobot molekul kira-kira 43 kDa yang merupakan bobot molekul rata-rata MnP
Gambar 5.7.
Keterangan: Pada sampel pemekatan 40 amonium sulfat sebelum kromatografi, diperoleh aktivitas UmL: MnP, 0; LiP, 0,179; lakase, 0,086.
Buffer pp+AS: buffer pirofosfat dan ammonium sulfat; M: marker LMW
Gambar 5.6 SDS-PAGE hasil kromatografi kolom gel hidrofobik Phenyl- Sepharose
terhadap sampel pemekatan 40 amonium sulfat isolat Pleurotus
EA4.
Keterangan: Pada sampel pemekatan 40 AS sebelum kromatografi, diperoleh aktivitas UmL: MnP, 0, 138; LiP, 0; lakase, 0,914; Crude E4 12 h ink: ekstrak kasar Pleurotus EA4
umur kultur 12 hari inkubasi.
Gambar 5.7 SDS-PAGE hasil kromatografi kolom penukar anion DEAE- Sepharose terhadap sampel pemekatan 40 amonium sulfat isolat
Pleurotus EB9.
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Lane : M = LMW
1 = ekstrak AS 60 2 = elusi 0.04 buffer pp+AS
3 = elusi 0.08 buffer pp+AS 4 = elusi 0.12 buffer pp+AS
5 = elusi 0.16 buffer pp+AS 6 = elusi 0.20 buffer pp+AS
7 = elusi 0.24 buffer pp+AS 8 = elusi 0.28 buffer pp+AS
9 = elusi 0.32 buffer pp+AS 10= elusi 0.36 buffer pp+AS
11= elusi 0.40 buffer pp+AS 12= ekstrak kasar
14,4 20,1
30,0 45,0
66,0 97,0
kDa
