Pupuk majemuk NPK, diberikan dengan cara menebarkan pupuk tersebut tepat di atas lahan tanam, supaya merata homogen
3.3.4. Isolasi Fungi dan Bakteri
Tanah yang berasal dari lokasi sekitar pembuangan sampah pada kedalaman 20 cm, diambil ekstraknya untuk mendapatkan isolat fungi dan
bakteri. Sepuluh gram tanah dilarutkan dengan 90 ml larutan fisiologis. Kemudian dikocok dengan alat pengocok shaker selama 20 menit. Larutan tersebut
kemudian diencerkan sampai diperoleh kepekatan 10
-6
untuk fungi dan 10
-7
untuk bakteri. Suspensi dari pengenceran untuk fungi yakni 10
-4
, 10
-5
, dan 10
-6
diambil 1 ml dan dituang ke cawan petri lalu ditambahkan medium pikovskaya steril.
Sedangkan untuk bakteri suspensi dari pengenceran 10
-4
, 10
-5
, 10
-6
dan 10
-7
, diambil 1 ml dan dituangkan ke cawan petri dan ditambahkan medium pikovskaya
cair. Kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu ruang. Koloni bakteri dan fungi yang menunjukkan zona jernih di sekelilingnya
diseleksi, kemudian dipindahkan pada cawan agar pikovskaya yang baru dan dinkubasi kembali.
Untuk memperoleh fungi yang benar-benar berzona jernih maka secara terus-menerus dilakukan seleksi dengan memindahkan koloni bakteri dan fungi
yang tumbuh pada cawan sebelumnya ke cawan agar yang baru. Hasil pemindahan terakhir dipindahkan pada agar miring dan disimpan di lemari
pendingin.
3.3.5. Pengujian Kemampuan Bakteri dan Fungi Pelarut Fosfat
3.3.5.1. Uji Kuantitatif
Isolat fungi yang diperoleh diuji kemampuannya dalam melarutkan P. Diambil 2 isolat bakteri dan 2 isolat fungi yang memiliki tingkat kemampuan
yang tinggi dalam melarutkan P. Isolat-isolat bakteri dan fungi pada agar miring, dipindahkan dan
ditumbuhkan pada cawan petri yang berisi pikovskaya padat. Setelah diinkubasi selama 48 jam, dipindahkan ke pikovskaya cair dengan sumber trikalsium fosfat
Ca
3
PO
4 2
. Kemudian diinkubasi selama 7 hari. Setelah masa inkubasi berakhir, ditetapkan P-larut dengan UV spektrofotometer dengan panjang gelombang 660
nm. Hasil dari pengujian ini dipilih 2 isolat fungi dan 2 isolat bakteri yang baik dan siap dicobakan ke tanaman.
3.3.5.2. Uji Kualitatif
Selanjutnya dilakukan penentuan Indeks Pelarutan IP dan kecepatan tumbuh dari setiap bakteri dan fungi yang telah terseleksi. yaitu dengan
menumbuhkan satu bulatan untuk masing-masing bakteri dan fungi dengan diameter tertentu pada mediua pikovskaya padat. Penentuan Indeks Pelarutan IP
dan kecepatan tumbuh dilakukan terhadap 6 bakteri dan 6 fungi pelarut fosfat yang berhasil diisolasi. Indeks Pelarutan IP ditentukan dengan cara membagi
diameter keseluruhan dengan diameter koloni untuk masing-masing bakteri dan fungi pelarut fosfat. Penghitungan diameter dan zona jernih terhadap bakteri dan
miselium fungi ini dilakukan tiap hari yang berlangsung selama 5 hari untuk bakteri dan 4 hari untuk fungi.
3.3.5.3. Penghitungan Total Mikroorganisme Pelarut Fosfat
Sebanyak 2.5 ml untuk masing-masing biakan bakteri dan fungi yang berada pada media cair pikovskaya setelah inkubasi 4 hari dimasukkan ke dalam
larutan 5 molase steril yang memiliki volume 90 ml untuk selanjutnya di inkubasi ± 3 hari. Kemudian dipipet 1 ml dan dimasukkan ke dalam 9 ml larutan
fisiologis secara aseptik dalam serangkaian seri pengenceran sampai 10
-8
. Kemudian dilakukan penghitungan CFU Colony forming Unit. Suspensi dari
pengenceran 10
-4
, 10
-5
, 10
-6
dan 10
-8
dituangkan pada cawan petri yang berisi media Nutrient Agar NA untuk pengujian CFU bakteri dan suspensi dari
pengnecran 10
-4
, 10
-5
, 10
-6
dan 10
-8
dipipet 1 ml dan dituangkan ke cawan petri yang berisi media Potatos Dektrose Agar PDA untuk penghitungan CFU fungi.
Selanjutnya diinkubasi selama ± 48 jam. Penghitungan total mikroorganisme pada pupuk hayati ini dilakukan untuk mengetahui jumlah populasi mikroorganisme
pelarut fosfat yang terdapat pada pupuk hayati sebelum diaplikasikan ke lahan tanam.
3.3.5.4. Uji Antagonis
