1. Waktu dan Tempat Penelitian

pada kelinci dari Sigma nomor produk E7028. Antibodi sekunder IgG kambing anti kelinci yang dilabeli dengan enzim HRP dari Cell Signaling Technology nomor katalog 7074 dan substrat DAB diaminobenzidine. Peralatan untuk pewarnaan IHK meliputi gelas objek dan kaca penutup, gelas piala, pipet, mikropipet, pemanas air, mikrotom, inkubator, alat penghitung waktu timer, lemari pendingin, lembar protokol IHK dan mikroskop. 3. 3. Tahapan Penelitian Penelitian ini dibagi menjadi tiga tahap. Tahap pertama meliputi preparasi sampel daun cincau hijau P.oblogifolia Merr, pembuatan bubuk daun cincau hijau dan pembuatan pakan yang digunakan untuk uji pada mencit C3H. Tahap kedua merupakan pengujian aktivitas antikanker dari bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. pada mencit C3H, meliputi tahapan penerapan pakan uji, transplantasi, dan terminasi. Tahap ketiga merupakan analisis histopatologis secara HE dan tahap deteksi ekspresi enzim kaspase-7 dan protein kinase JNK-12 sebagai protein penanda proapoptosis dan enzim COX-2 dan protein kinase ERK 12 sebagai protein penanda antiapoptosis dari jaringan kanker payudara mencit C3H dengan menggunakan metode IHK. 3. 3. 1. Pembuatan Bubuk Daun Cincau Hijau Chalid 2003 Pembuatan pakan mencit diawali dengan pembuatan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. Pembuatan bubuk daun cincau hijau diawali sortasi agar didapatkan daun yang bersih dari tangkai dan batang daun. 200 g daun cincau hijau yang telah bersih dicuci dan ditiriskan, setelah itu dilakukan penghalusan menggunakan blender dengan perbandingan antara daun cincau dan air 1:3. Bubur daun cincau yang dihasilkan sampai menghasilkan gel, didiamkan semalam dilemari es. Keesokan harinya gel dikeringkan menggunakan drum dryer, sehingga diperoleh bubuk daun cincau hijau kasar. Bubuk kasar daun cincau hijau yang diperoleh dihaluskan menggunakan blender maka diperoleh bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. halus yang siap digunakan sebagai campuran pada pakan mencit. Tahapan pembuatan tersebut secara lebih detil dapat dilihat pada Lampiran 1.