Klasifikasi Ahmed et al., 2015

24 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Sampel daun lalu direndam ke dalam etanol 70 selama 1 menit, kemudian direndam dalam larutan NaOCl 5,25 selama 5 menit, lalu direndam kembali ke dalam etanol 70 selama 30 detik dan terakhir dibilas dengan akuades steril selama 3-5 detik Radji et al., 2011. Potongan daun yang telah disterilisasi kemudian diletakkan di atas kertas saring Goveas et al., 2011. Potongan daun lalu dipotong menjadi bagian yang lebih kecil dengan ukuran ±1x1 cm 2 dengan pisau steril Phongpaichit et al., 2006. Potongan daun ditempatkan pada cawan petri yang berisi media PDA. Penanaman sampel dilakukan triplo dan tiap cawan berisi dua potongan daun. Media yang telah diinokulasi dengan potongan daun diinkubasi pada suhu ruang selama 14 hari Noverita et al., 2009. Akuades bilasan terakhir diambil dan diisolasi ke PDA lainnya. Perlakuan ini berfungsi sebagai kontrol sterilisasi permukaan daun Bahgat et al., 2014. Semua proses sterilisasi hingga proses isolasi dilakukan secara aseptis dalam Laminar Air Flow Noverita et al., 2009.

3.3.4 Pemurnian Kapang Endofit

Kapang endofit yang telah tumbuh di media PDA kemudian dimurnikan ke dalam media PDA baru dengan cara menginokulasi sedikit hifa dengan ose steril dari setiap koloni endofit yag berbeda. Kultur kapang endofit diinkubasi selama 14 hari pada suhu ruang Radji et al., 2011. Pemurnian dilakukan berdasarkan perbedaan secara makroskopis yaitu warna dan bentuk koloni kapang Ariyono et al., 2014. Pengamatan morfologi dilakukan selama 7-14 hari dan apabila masih ditemukan pertumbuhan koloni yang berbeda secara makroskopis, maka dilakukan pemurnian ulang hingga diperoleh isolat murni. Setiap isolat yang didapat dibuat duplo sebagai working culture dan stock culture Noverita et al., 2009. Stock culture diinkubasi pada suhu ruang selama 7 hari, kemudian disimpan pada suhu 4 o C sebagai kultur cadangan Kumala, 2014.