69 Gambar 4.8 menunnjukkan bahwa penetapan kadar tartrazin dan sunset
yellow lebih baik dilakukan pada panjang gelombang 450 nm. Walaupun faktor tailing sunset yellow sebesar 1,629 Tabel 4.2 lebih tinggi dari panjang
gelombang 440 nm Ft = 1,604 dan 470 nm Ft = 1,610. Hal ini dilakukan karena serapan sunset yellow dan tartrazin masing-masing pada panjang gelombang 440
nm dan 470 nm paling rendah.
4.2.3 Optimasi pH Fase Gerak
Hasil optimasi pH fase gerak diperoleh data berupa waktu retensi, faktor kapasitas, jumlah plat teoritis, resolusi, selektifitas dan faktor tailing.
Kromatogram optimasi pH larutan buffer fosfat dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 117 - 120. Pengaruh pH buffer terhadap parameter optimasi dapat dilihat
pada Tabel 4.3. Tabel 4.3 Pengaruh pH Buffer terhadap Parameter Optimasi
Keterangan: - = Tak terdeteksi
Universitas Sumatera Utara
70 Fase gerak buffer asam menyebabkan senyawa basa terionisasi sehingga
lebih cepat terelusi dan senyawa asam tidak terionisasi jika pH larutan buffer lebih kecil dari pKa senyawa asam tersebut sehingga lebih lambat terelusi atau
sebaliknya. Larutan buffer yang dipilih harus memberikan pemisahan terbaik berdasarkan nilai resolusi dan faktor kapasitas, selain itu juga memberikan waktu
analisis yang lebih singkat. Hubungan pH dengan faktor tailing, resolusi dan faktor kapasitas natrium
sakarin, natrium silkamat, natrium benzoat, kalium sorbat, tartrazin dan sunset yellow dapat dilihat pada Gambar 4.9.
Gambar 4.9 Hubungan pH dengan Faktor Tailing a, Resolusi b dan Faktor Kapasitas c Natrium Sakarin
, Natrium Silkamat
, Natrium Benzoat
, Kalium Sorbat
, Tartrazin
dan Sunset Yellow
a b
c
Universitas Sumatera Utara
71 Senyawa terpisah kurang baik pada fase gerak buffer fosfat pH 4,7 yang
ditandai resolusi natrium benzoat sebesar 1,980 Tabel 4.3 lebih kecil dari yang diizinkan untuk pengembangan metode, yaitu Rs
≥ 2 Snyder, et al., 2010. Hal ini memberikan informasi bahwa ionisasi natrium benzoat pKa = 4,2 pada fase
gerak buffer pH 4,7 menyebabkan waktu retensi menjadi lebih cepat dan resolusi menjadi buruk Gamabr 4.9 dan Lampiran 10. Natrium sakarin dan sunset yellow
mengalami tailing dan natrium siklamat mengalami fronting pada buffer fosfat pH 4,7 Tabel 4.3, Gambar 4.9 dan Lampiran 10. Hal ini memberikan informasi
bahwa ionisasi natrium sakarin pKa = 1,8, natrium siklamat pKa = 1,9 dan sunset yellow pKa = 9,2 menyebabkan bentuk kromatogram natrium sakarin dan
sunset yellow mengalami tailing, sedangkan natrium siklamat mengalami fronting. Semua senyawa pada buffer fosfat pH 4,0 terpisah dengan baik, ditandai
dengan resolusi 2, tetapi nilai faktor kapasitas kalium sorbat 22,560 Tabel 4.3, berada di atas batas maksimal yang diizinkan Gambar 4.9. Nilai faktor kapasitas
terlalu besar mengindikasikan bahwa waktu analisis menjadi lebih lama. Hal ini terjadi karena kalium sorbat pKa = 4,8 tidak mengalami ionisasi sehingga partisi
dengan fase gerak kurang baik. Faktor tailing natrium siklamat pKa = 1,9 sebesar 2,357 Tabel 4.3 dan Gambar 4.9. Hal ini memberikan informasi bahwa ionisasi
natrium siklamat pada fase gerak buffer fosfat pH 4,0 menyebabkan partisi dengan fase gerak kurang baik sehingga bentuk kromatogram menjadi tailing.
Senyawa terpisah dengan baik pada fase gerak buffer fosfat pH 4,3 dan pH 4,5 karena memenuhi persyaratan parameter optimasi yang ditandai dengan
resolusi 2, faktor kapasitas berada pada rentang persyaratan 0,5 ≤ k ≤ 20 dan
selektivitas 1. Namun, sunset yellow pKa = 9,2 mengalami tailing baik pada fase gerak buffer fosfat pH 4,3 maupun pH 4,5 Tabel 4.3 dan Gambar 4.9. Hal
Universitas Sumatera Utara
72 ini menunjukkan bahwa ionisasi sunset yellow pada fase gerak buffer fosfat pH 4,3
dan pH 4,5 menyebabkan partisi sunset yellow pada fase gerak kurang baik sehingga bentuk kromatogram menjadi tailing. Tabel 4.3 menunjukkan bahwa
faktor kapasitas kalium sorbat pada pH 4,3 k = 19,30 lebih besar dibandingkan pH 4,5 k = 17,20, sehingga analisis pada pH 4,3 lebih lama dibandingkan pada
pH 4,5. Oleh karena itu, larutan buffer fosfat yang dipilih untuk penelitian selanjutnya adalah buffer fosfat pH 4,5.
Pylypiw dan Grether 2000, menggunakan fase gerak campuran asetonitril dan buffer amonium asetat pH 4,2 untuk penetapan kadar natrium benzoat dan
kalium sorbat. Khosrokhavar, et al. 2010, menggunakan fase gerak campuran asetonitril dan buffer amonium asetat pH 4,4 untuk menetapan kadar natrium
benzoat dan kalium sorbat. Xiao ，et al. 2011, menggunakan fase gerak
campuran asetonitril dan amonium sulfat pH 4,4 untuk menetapan kadar aspartam, natrium sakarin, natrium siklamat, kalium asesulfam, neotam dan steviosida.
Shimadzu 2007, telah berhasil menetapkan kadar tartrazin dan sunset yellow dalam minunan dengan menggunakan fase gerak campuran asetonitril dan buffer
amonium asetat pH 4,7. Hasil penelitian masing-masing peneliti tersebut diperoleh informasi bahwa pemisahan senyawa dalam campuran memenuhi syarat yang
diizinkan. Penelitian yang dilakukan dengan menggunakan fase gerak campuran
metanol dan buffer fosfat pH 4,0 sampai pH 4,7 ternyata memberikan hasil yang terbaik pada fase gerak campuran metanol dan buffer fosfat pH 4,5; berada pada
rentang pH yang dilakukan oleh peneliti sebelumnya. Perbedaan pH terjadi karena perbedaan fase gerak organik dan jenis buffer yang digunakan serta komponen
senyawa yang dipisahkan.
Universitas Sumatera Utara
73
4.2.4 Optimasi Komposisi Fase Gerak
