22 menggantikan NO. Anion superoksida dapat bereaksi dengan NO membentuk
peroksinitrit, yaitu salah satu spesies oksigen reaktif yang sangat toksik. Radikal ini dapat secara efektif dibersihkan oleh SOD dan katalase.
2.4 Florotanin
Polifenol adalah salah satu fitokimia yang banyak tersebar di alam ini dan ada sekitar 8000 strukturnya yang telah diketahui. Mulai dari yang berupa fenol
sederhana hingga tanin yang berberat molekul lebih dari 30 kDa. Senyawa ini bila dikonsumsi dapat mencegah penyakit akibat radikal bebas. Senyawa ini mampu
menurunkan kejadian penyakit tersebut karena sifatnya yang mudah mendonorkan atom hidrogennya pada radikal bebas King, 1999; Chung et al., 1998; Lee et al.,
2004. Tanin adalah salah satu polifenol yang banyak terkandung dalam tanaman.
Senyawa ini terdiri dari tanin terkondensasi, tanin terhidrolisis dan florotanin. Tanin terkondensasi disusun oleh oligomer dan polimer flavonols, sedang tanin
hidrolisat tersusun oleh asam galat dan elagat. Tanin terhidrolisis dalam pangan manusia hampir dapat dikatakan jarang dijumpai dibanding tanin terkondensasi
Cheynier, 1999; Chung et al. 1998, Quideau et al., 2011. Florotanin adalah sejenis tanin yang berbeda dengan tanin yang terdapat
pada tanaman darat. Tanin ini terdapat pada rumput laut coklat. Senyawa ini dalam rumput laut coklat dapat mencapai 25 berat kering. Tanin ini tersusun
atas polimerisasi floroglusinol 1,3,5-trihidroksibensen. Berdasar stuktur ikatan antar floroglusinol, florotanin dapat dikelompokkan menjadi empat golongan,
yaitu: 1. florotanin yang terbentuk dengan ikatan eter, 2. florotanin yang terbentuk dengan ikatan fenil, 3. florotanin yang terbentuk dengan ikatan eter dan fenil, dan
4. florotanin yang terbentuk dengan ikatan dibenzodioksin. Singh and Bharate, 2006. Rumus bangun floroglusinol dan turunannya dapat dilihat pada Gambar 4.
23
OH OH
O H
OH O
H O
O H
OH OH
OH OH
OH O
H O
H OH
O
O H
OH OH
O H
OH OH
O H
O OH
O H
O
O H
OH O
O H
OH
Floroglusinol
Bifuhalol Difukol
Fukofloretol Eckol
Gambar 4. Rumus bangun floroglusinol dan turunannya Florotanin dalam rumput laut coklat terdapat dalam organel sel yang
disebut physodes. Organel ini terdapat dalam sitoplasma dan berbentuk lingkaran atau elips. Organel ini mudah berpindah-pindah dan mampu memantulkan cahaya.
Saat physodes bergerak dan berfusi ke dalam membran sel, florotanin akan disekresikan ke membran sel. Florotanin yang tersekresi itu selanjutnya akan
membentuk ikatan kompleks dengan asam alginat. Asam alginat adalah salah satu komponen utama membran sel rumput laut coklat selain alginat dan fukan Ogino
C, 1962; Shibata et al. 2004; Koivikko et al., 2005. Florotanin merupakan senyawa yang berwarna coklat kekuning-kuningan.
Senyawa ini akan terlihat coklat gelap bila ditempatkan di udara bebas dan memberikan warna merah bila direaksikan dengan asam klorida. Senyawa ini
bersifat higroskopis, pereduksi kuat dan mudah larut dalam pelarut polar Ogino C, 1962; Pavia et al., 2002. Kelarutan florotanin dalam berbagai pelarut dapat
dilihat pada Tabel 3. Tabel 3. Kelarutan florotanin dalam berbagai pelarut
No. Pelarut
Polaritas P’
Kelarutan
1. 2.
3. 4.
5. Air
Metanol Etanol
Kloroform Eter
10,2 5,1
4,3 4,1
2,8 Larut
Larut Larut
Tidak larut Tidak larut
Sumber: Ogino C 1962 Beberapa peneliti telah berhasil mengekstrak dan mengisolasi florotanin
dari beberapa spesies rumput laut coklat. Nagayama et al. 2002 telah mengekstraksi florotanin dari Eisenia bicyclis. Tepung rumput laut coklat ini
diekstrak dengan metanol 1:3;bv dalam erlenmeyer sambil digoyang dengan
24 kecepatan 90 rpm selama 48 jam. Selanjutnya disaring dan dipekatkan dengan
rotavapor. Ekstrak pekat selanjutnya ditambah metanol 240 mL, kloroform 480 mL, dan air bebas ion 180 mL. Setelah penambahan pelarut polar dan non-polar
tersebut, lapisan bagian atasnya dipisahkan dan diekstrak dengan etil asetat 300 mL 2 kali. Ekstrak ini selanjutnya dipekatkan dengan rotavapor dan dinyatakan
sebagai florotanin kasar. Sementara itu Wei et al. 2003 telah mendapatkan florotanin berberat
molekul besar dari S. kjelmanianum. Rumput laut ini yang telah ditepungkan diekstrak dengan etanol 85 1:2; bv sambil digoyang selama semalam di dalam
ruang gelap. Selanjutnya disaring untuk mendapatkan larutan coklat gelap. Larutan selanjutnya dipekatkan dengan rotavapor dan pekatan yang dihasilkan
dicuci kloroform 3 kali dan dilanjutkan dengan eter 3 kali. Lapisan aqueous didialisis dengan akuabides selama semalam dalam ruang gelap bersuhu 4
o
C. Selama dialisis akuabides diganti 3 kali. Dialisat selanjutnya dipekatkan dengan
rotavapor. Dialisat pekat selanjutnya dielusi dalam kromatografi kolom dengan toluen, aseton, dan aseton-metanol 1:2; vv. Eluat aseton-metanol dinyatakan
sebagai florotanin berberat molekul besar. Okada et al. 2004 telah mengisolasi turunan florotanin yaitu eckol dan
dieckol dari Eisenia kurome. Rumput laut coklat ini sebelumnya direfluks metanol 1:18;bv selama 3 jam dan 3 kali. Setelah metanol diuapkan, ekstrak selanjutnya
difraksinasi dalam kolom kromatografi dengan eluen air, metanol, aseton, dan etil asetat. Fraksi metanol difraksinasi lagi dengan metanol aquoeus, metanol, dan
aseton untuk menghasilkan fraksi 1-10. Fraksi 4 selanjutnya difraksinasi dengan metanol untuk mendapatkan fraksi 11-14. Fraksi 13 selanjutnya dielusi dengan n-
butanol-n-propanol-H
2
Berdasarkan pada strukturnya florotanin dapat berfungsi sebagai antioksidan. Beberapa penelitian menunjukkan senyawa ini mampu menunjukkan
aktivitasnya sebagai antioksidan. Yan et al. 1998 mendapati bahwa aktivitas scavenger
florotanin yang didapat dari S. kjelmanianum lebih kuat dibanding vitamin E. Sementara itu Lim et al. 2002 mendapatkan bahwa florotanin yang
diperoleh dari S. siliquastrum mampu menghambat aktivitas anion superoksida O 4:1:5; vvv untuk menghasilkan fraksi 15-23.
Akhirnya fraksi 21 teridentifikasi sebagai dieckol dan fraksi 22 sebagai eckol.
25 dan hidroksil radikal, sedang Kang et al. 2004 menunjukkan bahwa florotanin
dari rumput laut coklat spesies Ecklonia stolonifera mampu menghambat pembentukan spesies oksigen reaktif. Lebih lanjut Mori et al. 2003
menunjukkan bahwa florotanin yang didapat dari rumput laut coklat mampu menghambat peroksidasi lemak. Hal serupa dilaporkan oleh Wei et al. 2003
bahwa florotanin dari S. kjelmanianum yang berberat molekul besar juga mampu menghambat peroksidasi lemak. Okada et al. 2004 menyatakan florotanin yang
didapat dari Eisenia bicyclis potensial untuk mencegah terjadinya komplikasi diabetes yakni dengan menghambat pembentukan Advanced Glycation End
Products AGEs yaitu suatu radikal bebas yang dibentuk saat kondisi tubuh
mengalami hiperglikemia atau diabetes. Mekanisme aktivitas antioksidan florotanin dapat berupa donor hidrogen
proton, pengkelat logam dan peningkat aktivitas antioksidan enzim. Beberapa peneliti telah menunjukkan aktivitas tersebut antara lain: Nakai et al. 2006
memperlihatkan florotanin mempunyai kemampuan membersihkan anion superoksida lima kali lebih kuat dibanding katekin dan kekuatannya ini sangat
tergantung pada oligomerisasi penyusun florotanin, Ahn et al. 2007 menunjukkan florotanin E. cava adalah senyawa kaya elektron yang cenderung
memasuki reaksi donasi elektron yang sangat efisien, Rastian et al. 2007 memperlihatkan struktur dan keberadaan gugus hidroksil florotanin berperan
dalam fungsinya sebagai senyawa antioksidan. Ye et al. 2009 memperlihatkan florotanin dari S. pallidum dapat berfungsi sebagai antioksidan karena
kemampuannya dalam mendonorkan protonnya dan Li et al. 2009 menyatakan jumlah gugus hidroksil pada florotanin adalah yang paling bertanggung jawab
terhadap efektivitas aktivitas penurunan reaktivitas radikal bebas. Santoso et al. 2004 memperlihatkan ekstrak metanol S. polycystum
mampu menghambat oksidasi minyak ikan yang diinduksi Fe
2+
dengan kapasitas pengikatan pada logam tersebut sekitar 60, hal ini dimungkinkan karena
banyaknya gugus hidroksil yang terdapat pada florotanin. Florotanin S. pallidum menunjukkan aktivitas antioksidan dengan menghambat permulaan oksidasi
lemak melalui pembentukan ion kompleks terhadap ion Fe
2+
Ye et al., 2009. Sementara itu Lee at al. 2010b menyatakan florotanin dapat meningkatkan
26 aktivitas antioksidan enzim dengan terlebih dahulu menurunkan aktivitas radikal
bebas hingga gugus sulfhidril asam amino enzim tidak teroksidasi. Kang et al. 2006 berpendapat florotanin dapat melindungi fungsi antioksidan enzim akibat
radikal bebas dengan meningkatkan fosforilasi ERK.
3 BAHAN DAN METODE
3.1 Tempat dan Waktu
