selama 96 jam. Amati adanya kekeruhan pada media untuk hasil yang positif.
3.6.2.3.5 Uji Fermentasi Karbohidrat Uji Gula-gula
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi glukosa kapas kuning, laktosa kapas ungu,
maltosa kapas merah, manitol kapas hijau, dan sukrosa kapas biru. Kemudian inkubasi pada temperatur 35°C
selama 48 jam ± 2 jam. Amati adanya pembentukan gas pada tabung Durham dan perubahan pH menjadi asam
warna dari ungu berubah menjadi kuning untuk hasil yang positif.
3.6.2.3.6 Interpretasi Hasil Uji Biokimia
Dinyatakan positif Escherichia coli bila hasil uji IMViC adalah uji Indol positif atau negatif, uji MR positif,
uji VP negatif, dan uji citrate negatif. Sedangkan pada uji fermentasi karbohidrat adalah glukosa positif, laktosa
positif, maltosa positif, manitol negatif, dan sukrosa positif semua uji fermentasi karbohidrat positif kecuali uji
manitol.
3.6.2.4 Pewarnaan Gram
Pada EMBA, ambil koloni yang berwarna hitam atau gelap pada bagian pusat koloni, dengan atau tanpa metalik
kehijauan yang mengkilap dengan ose. Kemudian letakkan di atas kaca preparat, fiksasikan di atas api dengan cara melewatkan
kaca preparat di atas api sebanyak dua kali. Teteskan gentian violet sampai seluruh lingkaran tertutupi, tunggu sampai 5 menit.
Bersihkan di atas air mengalir. Lalu teteskan lugol dan tunggu hingga 1 menit. Bersihkan kembali di atas air mengalir. Teteskan
alkohol pada seluruh permukaan sampai tidak ada warna yang luntur kembali. Bersihkan kembali di atas air mengalir. Teteskan
safranin dan tunggu hingga 2 menit. Bersihkan kembali di atas air mengalir. Keringkan preparat di atas tisu.
3.6.2.5 Pemeriksaan Mikroskop
Teteskan minyak imersi terlebih dahulu sebanyak satu tetes. Kemudian periksa preparat di bawah mikroskop dari
perbesaran paling kecil terlebih dahulu. Setelah menemukan letakkan koloni, ganti perbesaran hingga 100 kali. Bentuk
Escherichia coli yang sesuai adalah berwarna merah, bentuk batang pendek, dan koloni tunggal.
Kategori