3.6.2.3 Uji Biokimia Bakteri 3.6.2.3.1 Uji Produksi Indole
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi SIM dan inkubasikan pada temperatur 35°C
selama 24 jam ± 2 jam. Lalu tambahkan beberapa tetes reagen Erlich hingga timbul cincin merah pada lapisan
atas untuk hasil yang positif, dan cincin kuning untuk hasil yang negatif.
3.6.2.3.2 Uji Methyl Red MR
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi 10 ml MR-VP dan inkubasikan pada
temperatur 35°C selama 48 jam ± 2 jam. Lalu tambahkan 2-5 tetes indikator MR pada tabung. Amati adanya warna
merah untuk hasil yang positif dan warna kuning untuk hasil yang negatif.
3.6.2.3.3 Uji Vogus-Proskauer VP
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi 10 ml MR-VP dan inkubasikan pada
temperatur 35°C selama 48 jam ± 2 jam. Ambil 5 ml MR- VP dan masukkan ke tabung reaksi, kemudian tambahkan
0,6 ml larutan α-naphthol dan 0,2 ml KOH 40, lalu
goyang-goyangkan. Amati adanya warna merah muda eosin setelah 2 jam untuk hasil yang positif.
3.6.2.3.4 Uji Citrate
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi KCB dan inkubasikan pada temperatur 35°C
selama 96 jam. Amati adanya kekeruhan pada media untuk hasil yang positif.
3.6.2.3.5 Uji Fermentasi Karbohidrat Uji Gula-gula
Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi glukosa kapas kuning, laktosa kapas ungu,
maltosa kapas merah, manitol kapas hijau, dan sukrosa kapas biru. Kemudian inkubasi pada temperatur 35°C
selama 48 jam ± 2 jam. Amati adanya pembentukan gas pada tabung Durham dan perubahan pH menjadi asam
warna dari ungu berubah menjadi kuning untuk hasil yang positif.
3.6.2.3.6 Interpretasi Hasil Uji Biokimia
Dinyatakan positif Escherichia coli bila hasil uji IMViC adalah uji Indol positif atau negatif, uji MR positif,
uji VP negatif, dan uji citrate negatif. Sedangkan pada uji fermentasi karbohidrat adalah glukosa positif, laktosa
positif, maltosa positif, manitol negatif, dan sukrosa positif semua uji fermentasi karbohidrat positif kecuali uji
manitol.
3.6.2.4 Pewarnaan Gram
Pada EMBA, ambil koloni yang berwarna hitam atau gelap pada bagian pusat koloni, dengan atau tanpa metalik
kehijauan yang mengkilap dengan ose. Kemudian letakkan di atas kaca preparat, fiksasikan di atas api dengan cara melewatkan
kaca preparat di atas api sebanyak dua kali. Teteskan gentian violet sampai seluruh lingkaran tertutupi, tunggu sampai 5 menit.
Bersihkan di atas air mengalir. Lalu teteskan lugol dan tunggu hingga 1 menit. Bersihkan kembali di atas air mengalir. Teteskan
