Susu Sapi Segar Kriteria Inklusi

pertama kali dengan cara memasukkan 25 ml sampel ke dalam labu Erlenmeyer yang berisi 225 ml larutan BPW Buffer Peptone Water 0,1 steril kemudian dihomogenkan. Larutan lalu diencerkan untuk kedua kali dengan cara diambil sebanyak 1 ml dari larutan homogen tadi ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml larutan BPW 0,1 steril dan dihomogenkan kembali. Langkah tersebut diulang sampai diperoleh larutan dengan pengenceran 10 -3 . 11 Untuk uji presumtif Escherichia coli, ambil 1 ml dari masing-masing larutan pengenceran ke dalam tabung Lactose Broth LB yang dimasukkan tabung Durham. Inkubasi dengan suhu 35 ᵒC ± 0,5ᵒC selama 24jam ± 2 jam. Amati adanya gas dalam tabung Durham pada tiap tabung LB hasil uji positif. 12,13 Untuk uji konfirmasi koliform, pada tabung LB dengan uji positif, diambil 1 mata ose dan ditanam ke dalam tabung berisi Brilliant Green Lactose Broth BGLB dan tabung Durham. Inkubasikan pada temperature 35 ᵒC selama 48 jam ± 2 jam. Amati adanya gas dalam tabung Durham pada tiap tabung BGLB lalu dicocokkan dengan tabel MPN untuk menyatakan jumlah Escherichia coli per milliliter atau per gram. 11

3.6.2.2 Identifikasi Bakteri

Dari tabung BGLB yang positif, ambil biakan dengan ose kemudian buat goresan pada media Eosin Methylene Blue Agar EMBA, dan inkubasi pada temperatur 35°C selama 18-24 jam. Amati koloni yang berwarna hitam atau gelap pada bagian pusat koloni, dengan atau tanpa metalik kehijauan yang mengkilap dengan diameter 2-3 mm pada media EMBA. 11 3.6.2.3 Uji Biokimia Bakteri 3.6.2.3.1 Uji Produksi Indole Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi SIM dan inkubasikan pada temperatur 35°C selama 24 jam ± 2 jam. Lalu tambahkan beberapa tetes reagen Erlich hingga timbul cincin merah pada lapisan atas untuk hasil yang positif, dan cincin kuning untuk hasil yang negatif.

3.6.2.3.2 Uji Methyl Red MR

Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi 10 ml MR-VP dan inkubasikan pada temperatur 35°C selama 48 jam ± 2 jam. Lalu tambahkan 2-5 tetes indikator MR pada tabung. Amati adanya warna merah untuk hasil yang positif dan warna kuning untuk hasil yang negatif.

3.6.2.3.3 Uji Vogus-Proskauer VP

Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi 10 ml MR-VP dan inkubasikan pada temperatur 35°C selama 48 jam ± 2 jam. Ambil 5 ml MR- VP dan masukkan ke tabung reaksi, kemudian tambahkan 0,6 ml larutan α-naphthol dan 0,2 ml KOH 40, lalu goyang-goyangkan. Amati adanya warna merah muda eosin setelah 2 jam untuk hasil yang positif.

3.6.2.3.4 Uji Citrate

Koloni dari media EMBA diinokulasikan pada tabung berisi KCB dan inkubasikan pada temperatur 35°C