tetrazolium pada MTT yang berwarna kuning pucat dan membentuk kristal formazan berwarna ungu yang tidak dapat keluar menembus membran sel,
sehingga terakumulasi dalam sel hidup Mosmann, 1983.
NH N
N N
S N
CH
3
CH
3
Formazan
NADH NAD
+
N N
N N
S N
CH
3
H
3
C
MTT
Br
-
Gambar 6. Struktur molekul dari MTT dan hasil reduksinya
Setelah inkubasi sel dengan MTT kira-kira 2-4 jam, ditambahkan larutan deterjen ke sel lisis dan melarutkan kristal berwarna. Warna ungu formazan harus
kelihatan di dalam sel sebelum larutan deterjen dapat ditambahkan. Jumlah sel yang masih hidup berbanding lurus dengan kadar formazan yang terbentuk.
Warna kemudian dapat diukur secara kolorimetri. Hasil dibaca dengan menggunakan ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay reader pada
panjang gelombang 570 nm absorbansi maksimum. Intensitas warna yang dihasilkan berbanding lurus dengan jumlah sel hidup Anonim, 2006 e.
Metode lain yang juga dapat digunakan dalam penilaian sitotoksisitas antara lain :
1. Metode
neutral red uptake
Metode ini
menggunakan neutral red dye, yang secara khusus diserap dan
terakumulasi ke dalam lisosom sel hidup. Absorbansi dibaca pada 540 nm dengan microplate reader, dibandingkan dengan kontrol. Absorbansi berkorelasi linier
dengan jumlah sel hidup. Kekurangan pada metode ini adalah pengendapan dye berbentuk kristal seperti jarum, halus, dan terlihat jelas. Metode ini sangat
sederhana, cepat, sensitif, dan ekonomis Barile, 1997.
2. Metode trypan blue
Trypan blue pertama kali disintesis tahun 1890 oleh ahli kimia di Jerman.
.
Gambar 7. Struktur trypan blue
Trypan blue, suatu noda khusus yang mewarnai jaringan mati atau sel menjadi biru. Ini merupakan diazo dye. Tes dengan trypan blue secara kualitatif
dan menandai hanya jika suatu sel dalam keadaan hidup serta hasil dibaca dengan individual. Sel atau jaringan hidup dengan membran sel tetap utuh tidak akan
diwarnai. Karena sel sangat selektif pada senyawa yang menembus membran, dalam sel hidup trypan blue tidak diserap. Karenanya, sel mati ditunjukkan
sebagai warna biru yang membedakan di bawah mikroskop Anonim, 2006 f.
3. Aktivitas LDH Lactate Dehidrogenase
Metode ini berdasarkan konsep bahwa sel yang mati melepaskan LDH ke dalam medium yang dapat diukur dengan metode spektrofotometri. Metode ini
mengukur secara kuantitatif viabilitas sel yang hilang dan merespon viabilitas sel, bukan metabolisme sel. Masalah yang ditimbulkan adalah stabilisasi LDH
