2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini ialah : a. Sampel umbi teki
b. Kultur sel SiHa dan sel Vero yang diambil dari stok di Laboratorium Hayati Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
c. Pereaksi-peraksi yang digunakan untuk preparasi fraksi protein umbi teki :
larutan dapar natrium fosfat 5 mM pH 7,2 ; larutan dapar natrium fosfat 5 mM pH 7,2 yang mengandung 0,14 M NaCl ; amonium sulfat p.a. Merck
d. Pereaksi-pereaksi untuk uji sitotoksisitas Medium pencuci : RPMI 1640 Sigma, natrium bikarbonat, Hepes ; medium
penumbuh : RPMI 1640, FBS Foetal Bovine Serum 10, Penisilin- Streptomisin 1 Gibco, dan Fungison 0,5 Gibco ; reagen stopper : SDS
Sodium Dodesil Sulfat dalam HCl 0,01 N ; MTT [3-4,5-dimethylthiazol-2- yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide] Sigma ; bahan untuk isolasi sel SiHa
dan sel Vero : tripsin 0,25
D. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi
tumbuhan
Bahan utama yang akan digunakan dalam penelitian yaitu umbi teki Cyperus rotundus L., telah diidentifikasi dan determinasi terlebih dahulu di laboratorium
Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta dan juga dipastikan kebenarannya menggunakan acuan baku Backer
dan Backuizen van den Brink, 1965. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2. Pengumpulan umbi teki
Umbi teki yang digunakan diambil dari Bandelan, Sumberarum, Moyudan, Sleman tepi Sungai Progo, pada bulan Juli 2006.
3. Sterilisasi alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini harus disterilkan terlebih dahulu untuk mencegah terjadinya kontaminasi. Alat-alat dicuci bersih dengan
sabun dan dikeringkan, setelah itu dibungkus dengan alumunium foil dan disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121
C Anonim, 1995.
4. Pembuatan medium pencuci dan medium penumbuh
a. Pembuatan medium pencuci RPMI 1640 dilarutkan dalam aquabidest kurang lebih 80 ml, ditambah 2,3 g
natrium bikarbonat, 2 g Hepes, diencerkan sampai 100 ml, pH dibuat 7,2, lalu disterilkan dengan filter berdiameter 0,22
μm. Medium disimpan dalam almari es pada suhu 4
o
C Freshney, 1986; Jacoby dan Pastan, 1979; Sambrook et al., 1989. b. Pembuatan medium kultur RPMI 1640-serum
Untuk medium RPMI 1640-serum, ditambahkan FBS 10, penisilin- streptomisin 1 dan fungison 0,5 dalam medium RPMI 1640 dan disterilkan
dengan filter berdiameter 0,22 μm. Media disimpan dalam almari es pada suhu
4
o
C Freshney, 1986; Jacoby dan Pastan, 1979; Sambrook et al., 1989.
5. Preparasi sampel a. Pembuatan fraksi protein dari
umbi teki Umbi teki dikumpulkan segar, diseleksi lalu dicuci bersih dengan air
mengalir. Umbi dipotong kecil-kecil lalu ditimbang sebanyak 400 gram, PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Kategori