UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
c. Sentrifugasi
Suspensi niosom disentrifugasi dan supernatannya dipisahkan. Pelet yang diperoleh dicuci kemudian disuspensikan kembali untuk mendapatkan
niosom yang bebas dari obat yang tidak terjerap. Efisiensi penjerapan vesikel ditentukan dengan memisahkan obat bebas
dari vesikel perjerap obat dengan menggunakan teknik ultrasentifugasi. Suspensi niosom disentrifugasi selama 50 menit pada 50.000 rpm dan suhu 4°C dengan
tujuan untuk memisahkan obat yang tidak terjerap. Jumlah obat bebas FD ditentukan pada supernatan. Supernatan hasil sentrifugasi ditetapkan kadarnya
dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis Pham, Maalej, Charcosset, 2012.
Efisiensi penjerapan EE dihitung dengan rumus : EE =
-
x 100 2. 1
Keterangan: TD
= total senyawa fenolat yang terdapat dalam formula FD
= jumlah senyawa fenolat yang terdeteksi pada supernatan tidak terjerap.
2.8 Spektrofotometer UV – Vis
Spektrofotometer digunakan untuk mengukur serapan sinar ultraviolet dan sinar tampak oleh suatu materi dalam bentuk larutannya. Jumlah cahaya yang
diserap oleh suatu zat dalam larutan berbanding lurus dengan konsentrasi zat dalam larutannya. Sinar tampak memiliki daerah panjang gelombang dari 400 nm
hingga 750 nm. Sinar tampak tersusun dari beberapa warna, yaitu merah, jingga, kuning, hijau, biru, dan ungu. Umumnya senyawa yang dapat memberikan
serapan ketika diukur dengan spektrofotometer adalah senyawa yang memiliki gugus kromofor. Kromofor adalah gugus fungsional yang mengabsorbsi radiasi
ultraviolet dan tampak, jika mereka diikat oleh senyawa-senyawa bukan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
pengabsorbsi auksokrom. Auksokrom adalah gugus fungsional yang memiliki elektron bebas, seperti OH, -O, -NH3, dan –OCH3.
Lambert – Beer telah menurunkan secara empirik hubungan antara intensitas cahaya yang ditransmisikan dengan tebalnya larutan dan hubungan
antara intensitas sinar dengan konsentrasi zat. Hukum Lambert – Beer :
A = log Io It = γ.b.c = a.b.c 2. 2
Keterangan: A = serapan
Io = Intensitas sinar yang datang It = Intensitas sinar yang diteruskan
γ = absorbtivitas molekuler mol.cm. It
-1
a = daya serap g.cm. It
-1
b = tebal larutan kuvet cm c = konsentrasi g. It
-1
.mg.ml
-1
Hukum Lambert – Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan oleh larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan.
Dalam hukum Lambert – Beer terdapat beberapa pembatasan yaitu sinar yang digunakan dianggap monokromatis, penyerapan terjadi dalam suatu volume ruang
memiliki penampang luas yang sama, senyawa yang menyerap dalam larutan tidak tergantung terhadap yang lain dalam larutan tersebut, tidak terjadi peristiwa
fluoresensi atau fosforisensi, dan indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan.
Dalam aplikasinya, terdapat beberapa persyaratan agar hukum Lambert- Beer dapat digunakan, yaitu:
a. Konsentrasi larutan yang diukur harus encer.
b. Zat pengabsorbsi zat yang dianalisis tidak boleh terdisosiasi, berasosiasi,
atau bereaksi dengan pelarut menghasilkan produk lain. c.
Radiasi cahaya yang digunakan untuk pengukuran harus monokromatis cahaya yang mempunyai satu macam panjang gelombang.
d. Kekeruhan larutan yang disebabkan oleh partikel-partikel koloid misalnya
menyebabkan penyimpangan hukum Lambert-Beer.
